枯草芽孢杆菌系统表达异菌脲水解酶基因ipaH开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1. 课题意义

异菌脲（iprodione，别名扑海因，3-（3,5-二氯苯基）-1-异丙基氨基甲酰基乙内酰脲）是一种高效的二甲酰亚胺类杀菌剂，具有药用范围广、低毒等特点。主要防治葡萄、草莓、蔬菜等的灰霉病，马铃薯的早疫病、黑斑病，苹果斑点病、早期落叶病、轮纹病和果树菌核病等；也可用于香蕉、苹果、柑橘、梨等水果贮存期防腐保鲜处理^[1-3]。它既可以抑制真菌孢子的萌发及产生，也可以抑制菌丝生长^[4]，对病原类真菌生长和发育的各阶段都有抑制作用。

异菌脲作为高效杀菌剂，在世界范围内被广泛应用，有效地提高了作物产量。但也因其大面积长期连续使用，造成异菌脲在土壤、环境、作物中均有残留。残留的异菌脲不仅造成环境污染，还会使粮食蔬菜中含大量农药成分，这些残余农药还通过生物富集转移给动物及人类，给食品安全和人类健康带来了威胁。2017年中国云南省元谋县农村居民的尿检结果显示，230份尿样共检出102份有异菌脲残留，检出率高达44.35^[5]，引起了大众关注。

2. 研究的基本内容和问题

1. 研究目标

研究枯草芽孢杆菌系统表达ipah基因和生产异菌脲水解酶的潜力

3. 研究的方法与方案

1. 研究方法

细菌培养、转化技术：制作枯草芽孢杆菌感受态，转化导入ipah基因

4. 研究创新点

1.首次在枯草芽孢杆菌体系中表达异菌脲水解酶ipah

2.调整前端信号肽的序列，优化蛋白质的表达

3.优化枯草芽孢杆菌发酵条件，建立该平台表达蛋白的标准流程

5. 研究计划与进展

2019年2月 完成表达载体pp43nmk-ipah的构建，并测序通过。

2019年3-4月 转化枯草芽孢杆菌获得阳性转化子，开始进行发酵降解实验。

2019年4-5月 优化发酵条件，为制作发酵菌剂奠定基础