1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1.课题意义
灵芝(ganoderma lucidum karst)是真菌界（kingdom fungi），担子菌门（basidiomycota）中的一种大型药用真菌。灵芝含有多种生物活性物质，主要有多糖、三萜类物质。灵芝多糖能够抗癌和提高免疫力。灵芝三萜具有保肝排毒、抑制癌症、抗炎症、调节血脂、降血压等功效。灵芝在医疗领域具有重要而广泛的药用价值。
琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase，简称sdh）又称线粒体复合物Ⅱ，是三羧酸循环中整合于膜上的多亚基酶，与线粒体电子传递链相连，催化从琥珀酸氧化到延胡索酸和从泛醌还原到醌的偶联反应[1]。琥珀酸脱氢酶包含4个亚单位：黄素蛋白 (fp，含 1 个共价结合的 fad 辅因子)、铁硫蛋白 (ip，含 3 个铁硫中心) 和 另外 2 种嵌膜蛋白 (大的细胞色素结合蛋白 cytbl和小的细胞色素结合蛋白 cytbs)。fp和 ip 组成该复合体的可溶部分，具有琥珀酸脱氢酶活性；cytbl 和 cytbs 两种嵌膜蛋白将 fp、ip固定在内膜上，且具有泛醌还原酶活性。在真核生物体灵芝当中，琥珀酸脱氢酶作为线粒体中呼吸链重要的组成部分，其功能和活性对灵芝的生长和活性物质产生至关重要[2]。
2. 研究的基本内容和问题
1研究目标
本研究以灵芝为材料，构建灵芝线粒体琥珀酸脱氢酶亚基的基因表达载体，在大肠杆菌表达系统中表达目的蛋白，并进行蛋白纯化，获得相应产品，有助于研究灵芝培育和提高活性物质产品产量和质量。
2研究内容
3. 研究的方法与方案
1研究方法
1.1rna提取
经过酸缸浸泡的研钵，煮沸20min使用。液氮预冷研钵，将样品置于研钵中，加入液氮研磨成粉。取适量样品移入含800 μl rnaiso plus的离心管中，剧烈颠倒混匀；离心12000 rpm，4 ℃，5 min；取上清液至离心管中，加入1/5体积氯仿，剧烈震荡，冰上静止；离心后分三层；取上清液，加入等体积异丙醇，颠倒混匀，室温静止；离心后出现沉淀；弃上清，沿管壁加入75 % 乙醇，轻微颠倒洗涤沉淀；弃乙醇，瞬离，用枪吸除剩余液体；rnase-free ddh2o溶解。rna样品存放于-70℃冰箱中保存。
4. 研究创新点
构建灵芝线粒体琥珀酸脱氢酶亚基的基因克隆载体和表达载体。
5. 研究计划与进展
2019年9月 确定研究方向和研究计划
2019年10月—2019年11月 学习实验相关技术，初步开始实验，并撰写文献综述
2019年12月 构建灵芝线粒体琥珀酸脱氢酶基因克隆载体
