1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1.课题意义：微生物的多样性分为三个层次：微生物遗传多样性，种群多样性和生态系统多样性。
在土壤环境下，造成微生物多样性的因素有土壤养分，土壤质量和土壤中微生物之间的群落关系等。
土壤微生物多样性是衡量土壤质量变化的重要指标，土壤微生物参与了约90%的土壤反应[1]，在土壤环境与微生物群落共同作用下，造成了微生物在土壤中的分布格局和活动[2]。
3. 研究的方法与方案
7.研究方法7.1土样总dna的提取纯化试剂盒提取所有土壤样品均采用omega公司的土壤总dna 提取试剂盒提取，具体的操作步骤按照试剂盒说明书进行，提取完毕用1%的琼脂糖凝胶电泳检测dna浓度，于-20℃保存备用。
7.2微生物计数方法：包括平板计数和实时定量pcr等方法。
7.3土壤微生物多样性分析高通量测序分析采用illumina高通量测序平台，对微生物16s rdna和功能基因进行测序，对微生物16s rdna和功能基因进行otu类型划分，并计算微生物多样性指数8.技术路线及处理因素8.1技术路线参看附件8.2处理因素处理因素 种植三叶草 无覆盖 地膜覆盖 醋糟 醋糟 土壤调节剂 醋糟 矿源黄腐酸钾 醋糟 生物炭肥 醋糟 微生物菌剂 注：对照为葡萄园内不施加醋糟及肥料的原生土壤。
4. 研究创新点
本课题的主要研究内容属于土壤微生物分子生态学研究领域，本课题的特色在于土壤学、微生物学以及生物信息学交叉研究，创新之处有以下两点：1.采取了新型肥料生物炭肥与微生物菌剂对土壤微生物多样性的影响研究，为葡萄园土壤有机培肥提供理论依据。
2. 利用高通量测序技术比较土壤和施肥后中细菌群落结构的变化，可以明确了培肥土壤微生物多样性之间的差异。
5. 研究计划与进展
10.1研究计划2017.11-2017.12：查阅和收集资料，明确具体研究方案2017.12：土壤总DNA提取2018.1 ：土壤样品微生物数量测定2018.3-2018.4：细菌16S rDNA、真菌ITS高通量测序、土壤理化性质测定2018.4-2018.5：数据统计和生物信息分析，试验的补充和完善，撰写论文并定稿10.2预期结果1) 阐明不同施肥条件下土壤微生物多样性的影响差异； 2) 深入理解实验思路，掌握微生物多样性分析的方法，完成论文定稿。
