沙雷氏菌FS14中抗氧化相关基因的筛选及初步研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

生物体中由生理代谢和环境胁迫产生的活性氧(ros) 包括超氧阴离子，羟基自由基和过氧化氢。

在氧化胁迫初期由于抗氧化系统的存在，低浓度的h2o2可作为信号分子调节不同的代谢反应；但当其积累量超出清除系统的清除能力时，导致细胞氧化伤害[1]。

当ros产生超出机体的抗氧化能力范围后，ros会对细胞的蛋白质和磷脂造成损害，甚至直接诱导细胞产生凋亡信号分子自由基中以氧自由基对机体的危害最大，例如超氧阴离子自由基、羟自由基（oh）、过氧化氢及单线态氧等。

2. 研究的基本内容和问题

1研究的目标获得多个与细菌抗氧化相关的基因，尤其是未被发现或深入研究过的基因。

2研究的内容在沙雷氏菌突变子库中筛选并鉴定出对过氧化氢敏感的突变株，克隆相关基因及鉴定及进行验证，如果时间允许，对这些基因的抗氧化保护机制做进一步研究。

3拟解决的关键问题过氧化氢不稳定，容易造成结果重复性差。

3. 研究的方法与方案

1研究方法（1）通过在培养基中加入h2o2的方法，进行抗氧化能力强/弱的突变株的筛选与鉴定。

（2）细菌总dna的提取、酶切、自连、转化及质粒提取。

（3）tn5侧翼dna插入序列（可能与抗氧化相关的基因序列）的扩增、测序及序列分析。

4. 研究创新点

国内外对沙雷氏菌抗氧化有关的研究不多，本课题可丰富对沙雷氏菌抗氧化系统的研究。

5. 研究计划与进展

2017.11-2018.3 突变株的筛选与鉴定2018.3-2018.4 细菌总DNA的提取、酶切、自连、转化及质粒提取2018.4 中期检查2018.4 Tn5侧翼DNA插入序列的扩增、测序及序列分析2018.4-2018.5 定点突变验证筛选出的抗氧化相关基因2018.5 撰写毕业论文、准备答辩