PpCBEL植物瞬时表达载体和真核表达载体的构建与验证开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1、课题的意义：植物总是暴露在潜在的病原体和害虫面前，因此植物体内就需要有一个应对这些威胁的复杂的免疫系统，否则就会对生态系统和农业造成毁灭性的生态和经济后果。

植物采用模式识别受体（prrs）识别病原体相关分子模式/微生物相关分子模式（pamaps/damps）来激活基础免疫或非寄主抗性，引起植物的局部和全身的免疫识别。

而我们可以利用这些免疫识别受体来提高作物抗病性，帮助农业生产。

2. 研究的基本内容和问题

利用PpCEBL能够在本氏烟上引起坏死的能力来筛选受体，再通过互作以及免疫测定实验来验证受体。

在确定受体之后，再对CBEL识别受体的功能进行进一步的研究分析。

3. 研究的方法与方案

1、研究方法、技术路线及实验方案：（1）cbel蛋白的表达与纯化。

将含有cbel蛋白的ppic9k载体或空载体转化到毕赤酵母（pichia pastoris）菌株x33（muts ）或km71（muts）中。

然后将酵母在ypd培养基中30oc过夜培养，之后在bmgy（缓冲甘油复合培养基）和bmmy（缓冲甲醇复合培养基）（ph=6.5）中生长来诱导蛋白的表达。

4. 研究创新点

1、利用实验室前期建立的本氏烟受体沉默载体库筛选已经报道的PAMP的识别受体；2、筛选过程中所用到的是酵母纯化的蛋白，而不是之前研究报道的瞬时表达技术；3、PpCBEL作为一个多年之前就被鉴定到的PAMP，其在植物上的受体至今仍然没被克隆到。

5. 研究计划与进展

1、研究计划：（1）2017年8月2017年12月克隆ppcbel并对其在烟草上引起坏死能力进行初步探索。

在毕赤酵母中诱导目标蛋白表达，并纯化目标蛋白。

（2）2018年1月2018年4月检测纯化好的蛋白在本氏烟上引起的坏死及免疫反应，根据坏死及免疫反应从实验室的沉默基因载体库只能够寻找可能的识别受体。