沙雷氏菌FS14中乙酰转移酶17180和18450基因的克隆表达和生理功能研究开题报告

 2022-02-08 20:09:47

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

酰基转移酶(acyltransferase)是一个多功能蛋白质大家族,不同的酰基转移酶对生物体的遗传、基因表达、物质代谢、信号传导等方面起着重要的作用。

[1]其主要功能就是催化蛋白质的酰基化和去酰基化。

酰基化和去酰基化又是真核生物蛋白质翻译后修饰中最普遍的方式,所以在某种意义上讲,酰基转移酶又有调节蛋白质生物活性、基因表达等多种功能。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标: 通过构建含有l085_17180和l085_18450基因的质粒,然后转化入表达宿主e. coli c43(de3)中,进行体外表达,并鉴定其生理生化特性。

研究内容:一、设计引物,构建含有l085_17180和l085_18450基因的质粒,转入表达宿主e. coli c43(de3)中。

二、诱导表达并检测该基因对抗生素抗性的影响。

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3. 研究的方法与方案

研究方法:分子生物学方法:1、pcr扩增目的dna;2、限制性内切酶及连接酶用于构建含启动子区域的报告基因载体;酶切方法:限制性内切酶酶切机连接用于构建含启动子区域的报告基因载体。

本研究将报告基因(reporter gene)lacz的编码序列和所要研究的基因的调节序列相融合形成融合基因;3、一步法制备各感受态的细胞,进行转化。

实验方案:实验材料:1、 菌株:serratia marcescens fs14(本实验室分离,鉴定和保存)、大肠杆菌dh5α(λπ)(本实验室保存)、大肠杆菌c43(de3)(本实验室保存)2、固体lb培养基:胰蛋白胨(1%),nacl(1%),酵母提取物(0.5%);琼脂粉(1.5%);液体lb培养基:胰蛋白胨(1%),nacl(1%),酵母提取物(0.5%);氨苄西林(amp)、药敏纸片。

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4. 研究创新点

n-α-乙酰化是最普遍的蛋白修饰形式之一,它具有重要的生物学功能。

由于乙酰基的引入,蛋白的正电性被中和,进而影响蛋白质功能和稳定性。

n-乙酰基转移酶,是调控n-α-乙酰化的重要蛋白,它在细胞生长过程中发挥着许多作用。

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5. 研究计划与进展

研究计划:2017.10-2017.11:查阅资料、文献;学习和熟悉基本实验操作;利用实验室已有条件进行基础实验。

2017.11-2018.1设计引物、构建含有l085_17180和l085_18450基因的质粒,转入表达宿主e. coli c43中。

2018.1-2018.3进行体外表达,并进行生理生化测定。

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