1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
microrna (mirna)是一类长度为22个核苷酸（nucleotide，nt）左右，在多细胞生物中广泛表达的非编码rna[1, 2]。
mirna主要通过结合靶基因mrna3非编码区的互补序列，从而降低靶基因的蛋白质翻译水平和/或mrna的表达水平[1, 3]。
mirna调控多种生理过程；mirna表达量的高低、变化可以反映生物个体、组织、细胞的表型，也可以用于人类疾病（如癌症）的诊断、预后以及治疗[2, 4, 5]。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：从进化的角度阐明dicer剪切机制的保守性以及mirna表达的调控。
研究内容1）探究斑马鱼dicer是否能够独立剪切pre-mirna，其辅因子tarbp2是否能够增强它的剪切活性。
2）探究人，斑马鱼，果蝇dicer与其辅因子的作用机制差异产生的原因。
3. 研究的方法与方案
技术路线构建表达载体 - 蛋白纯化-体外co-ip实验体外dicer剪切实验体外转录pre-mirnas 研究方法和实验方案1） 构建斑马鱼dicer蛋白和dicer辅因子tarbp2的表达载体2） 转染293t细胞，纯化蛋白3） 进行体外co-ip实验4） 根据mirbase，体外转录合成数以百计的斑马鱼的pre-mirnas5） 进行底物的dicer体外切割反应可行性分析 综合评估项目所在实验室的研究基础、设施条件；项目的研究内容和目的；实验人员，发现本项目的可行性较高。
项目所在的实验室长期从事mirna和相对特异性方面的研究，具有完成该工作所必须的相关经验和实验工具。
关于项目中涉及的相关技术（如分子克隆、报告质粒、细胞培养、细胞转染蛋白检测与纯化等）已相当娴熟，对于rna序列分析、二级结构预测、geo数据管理、规范化、分析和spearman相关性研究，实验室在之前发表的论文中已提供了一套完整的方法、步骤和策略。
4. 研究创新点
本项目将首次构建完成斑马鱼Dicer蛋白的表达载体，并从进化的角度阐明Dicer蛋白的剪切机制和microRNA表达的调控。
5. 研究计划与进展
研究计划2017.10-2017.11 构建斑马鱼dicer蛋白的表达载体2017.11-2017.12 表达纯化斑马鱼的dicer蛋白和dicer辅因子tarbp2; 体外co-ip实验。
2017.12-2018.1 根据mirbase，体外转录合成数以百计的斑马鱼的pre-mirnas；体外dicer剪切实验。
2018.2-2018.4 对比人，果蝇dicer的生化活性，探究不同物种中dicer作用机制差异产生的原因。
