1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
micrornas(mirnas)是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码rna,其大小为20~25个核苷酸。
这些小的非编码rna被整合到argonaute（ago）蛋白中，在那里它们通过与靶转录物的碱基配对来指导转录后基因沉默。
许多研究已经证明，迄今为止，大多数初步获得功能线索的 microrna 表现在从低等植物到高等动物中多方面发挥着多元化调控作用。
2. 研究的基本内容和问题
研究目的了解探究microrna靶基因的实验方法，并且鉴定mir-210靶基因的相互作用位点。
研究内容使用hits-clip交联argonaute（ago）蛋白-rna复合物以及一些生物化学的方法，并结合生物信息学分析鉴定mir-210靶基因的相互作用位点。
并且共转染后通过蛋白质免疫印记法检测靶基因表达水平。
3. 研究的方法与方案
实验方案与研究方法1、ago hits-clip：一般来说，全基因组clip技术包括交联、部分rna消化、免疫沉淀、逆转录和测序。
具体而言，ago hits-clip将新鲜冷冻的组织细胞粉碎并进行紫外线照射来使rbps与rnas交联产生相互作用。
将ago相关的rna免疫沉淀，在证实ago免疫沉淀的特异性后，放射性标记rna，通过sds-page和硝酸纤维素转移进一步纯化交联的ago-rna复合物，并通过放射自显影显现它们。
4. 研究创新点
特色或创新之处目前，研究人员主要依靠对mir结合位点的计算预测作为识别生物相关靶点的第一步。
但是由于现有的生物信息学方法还是有许多缺点和弊端：不同的算法可能会产生不同假阳性结果。
故本实验集中在使用高通量的方法，采用ago hits-clip定义在体内ago相互作用的位点，解码小鼠脑中mirna-mrna相互作用的精确图谱，探究mirna在各种生物环境中的直接靶基因。
5. 研究计划与进展
研究计划2018年3月初2018年3月中旬查阅相关资料，熟悉相关实验方法，确定具体实验方案2018年3月中旬2018年4月中旬完成Ago HITS-CLIP，得到测序结果2018年4月中旬2018年5月中旬完成生物信息学分析及结果验证2018年5月中旬2018年6月初整理实验及数据，撰写结题报告和毕业论文预期进展鉴定出mir-210的靶基因位点，验证两者的相互作用。
不过由于时间关系，后期信息学数据分析可能不会做这么多。
