呋喃丹降解菌的鉴定及其水解酶基因克隆开题报告

 2022-02-08 20:10:27

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

意义呋喃丹(2,3-二氢-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基甲氨基甲酸酯)又名克百威,是一种高效、广谱、残效期长、剧毒的杀虫剂,主要用于控制玉米,草莓,马铃薯等粮食蔬菜种植的虫害,对促进作物增产、增收具有重要作用。

呋喃丹目前在我国已被列为限制性使用农药[1],但由于曾被广泛应用于农业生产,以及其水溶性较大,内吸性强等特点,以至于多种植物和水生生物都可以从环境中摄取呋喃丹残留物。

因此其在土壤中的残留仍然威胁着人体健康和生态环境的平衡[2-4]。

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2. 研究的基本内容和问题

目标从环境中分离出呋喃丹降解菌株、研究其降解的特性,探究出其降解呋喃丹的最适条件,并找出其中关键酶的基因,为呋喃丹污染环境的生物修复提供理论依据和科学基础。

内容1.从土壤样品中筛选分离出呋喃丹降解菌株; 2.鉴定呋喃丹降解菌株的生理生化特性,菌落形态及抗性谱;3.测定呋喃丹降解菌株的16s rrna基因序列;4.经过序列比对分析后,确定呋喃丹降解菌株的系统发育地位;5.检测呋喃丹的降解效果,探究降解的最佳条件,包括不同的温度,ph,通气量,nacl浓度以及碳氮源。

拟解决的关键问题1.探究不同条件下菌株对呋喃丹的降解情况。

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3. 研究的方法与方案

研究方法1.紫外分光光度计检测呋喃丹含量:取2 ml降解培养液于12000 rpm离心2 min,将上清液在uv-2450型分光光度计的200~350 nm区间内扫描,判断呋喃丹的降解情况和确定高效液相检测波长。

2,高效液相色谱法检测(hplc)呋喃丹含量:取2 ml降解培养液,12000 rpm离心2 min,上清液用0.22 μm水相滤器过滤,处理好的样品用液相色谱仪检测农药呋喃丹的含量。

高效液相色谱条件:色谱分离柱为kromasil 100-5c18反相柱(4.6 mm 250 mm 5 μm);柱温40c;甲醇/水(80:20, v/v)为流动相,流速为0.8 ml/min;紫外检测波长为280 nm;进样量20 μl。

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4. 研究创新点

目前分离出的呋喃丹降解菌株还较少,对其降解机制也不够了解,通过实验探究可进一步加深对呋喃丹降解机理的认识。

5. 研究计划与进展

2017年9月~12月 鉴定呋喃丹降解菌株的生理生化特性,菌落形态及抗性谱;测定呋喃丹降解菌株的16S rRNA基因序列;经过序列比对分析后,确定呋喃丹降解菌株的系统发育地位;2017年12月~2018年5月检测呋喃丹的降解效果,探究降解的最佳条件,包括不同的温度,PH,通气量,NaCl浓度以及碳氮源。

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