1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）1. micrornas(mirnas,微核糖核酸) 和argonaute蛋白简介mirnas是一类在多细胞生物中广泛表达、大小为22个核苷酸(nucleotide, nt)左右的非编码rnas(1,2)。
mirna分子与argonaute(ago)蛋白形成一个复合体，然后结合靶基因mrna位于3非编码区的部分互补序列，从而降低靶基因的表达水平(1,3)。
mirnas调控各种各样的生物过程, 并且和人的疾病如癌症密切相关(2,4-6)。
2. 研究的基本内容和问题
1.1. 研究目标这一项目的研究旨在回答这一问题：ago2基因突变导致其表达、功能上的缺失对人的癌细胞的生长和转移有何影响？ 我们的成果将揭示ago2在人类癌症中的作用、机理，为未来研究、检测、抑制肿瘤发生和转移提供理论基础与新的实验模型、思路和手段。
1.2. 研究内容1.使用crispr-cas9技术构建ago2功能性缺失的癌症细胞模型。
设计针对和ago2基因的特异性sgrna，用crispr-cas9系统转染有代表性的三种人类癌症细胞系：a2780（子宫癌）、h1299（肺癌）、pc3（前列腺癌），以分别突变ago2基因。
3. 研究的方法与方案
2.拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析2.1.设计针对ago2的sgrna，构建crispr-cas9载体 crispr-cas9技术的关键步骤是设计恰当的sgrna(17)。
cas9识别一短dna序列5-ngg-3，而20nt rna的向导序列就紧靠在它的5。
因此，要突变的基因位点必须有此序列：5-n20-ngg-3。
4. 研究创新点
本课题原创性强，设计充分考虑到申请项目的经费规模,研究思路和步骤简炼, 但意义重大。
采用最新最好的基因剪辑技术,在人的癌细胞内高效地突变ago2基因，构建基因突变的细胞模型，这样可以节约大量的时间、人力、物力、财力。
然后在免疫缺陷性小鼠系统中研究这些细胞在体内的生长，又将快速有效地鉴定ago2在癌细胞中的功能。
5. 研究计划与进展
2018.3-2018.5：设计针对Ago2的sgRNA，构建CRISPR-Cas9载体；转染人的癌细胞系；筛选稳定突变的细胞株，分析其基因突变的具体情况。
2018.5-2018.6：研究细胞株在体外培养条件下的生长情况和迁移速度;以上为大致的计划，因研究内容互相关联，在实际工作中将交叉进行,并将根据进展情况适当调整。
