甲烷氧化菌Methylomicrobium buryatensis中MxaB的表达与纯化开题报告

 2022-01-22 11:01

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

1.本课题意义1.1 近几年镧被证实是生命的元素镧系元素属于稀土元素的一种,包含化学元素周期表第3副族中镧、铈、镨、钕、钷、钐、铕、钆、铽、镝、钬、铒、铥、镱、镥等15种元素。

镧系元素虽然隶属于地球稀土元素,但其在地壳中的含量却是非常丰富的(skovran e la,39 ppm; cu,60 ppm; zn,70 ppm)(krishnamurthy n 2004), 但由于高不溶性及稀有的纯单质形态,镧系元素的获得需要借助于苛刻的纯化手段。

由于在广谱性,超电导能力,磁场学方面具备卓越的特征,镧系元素被大量的运用到了风力涡轮机,氢动力汽车,磁铁和催化转化器,以及日常使用的手机电池,电脑的生产中(jain d et al. 2015; rademaker jh et al. 2013)。

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2. 研究的基本内容和问题

1.研究的目标 1.明确镧元素介导的甲醇脱氢酶调控通路的关键元件,并研究其确切的调节机制。

2.阐明菌株5gb1c中运输镧元素离子的运送蛋白,并揭示其具体的运送机制。

2.研究的内容本项目以嗜甲烷细菌的代表菌株m. buryatensis 5gb1c为供试菌株,其基因组中mxafi和xoxf型甲醇脱氢酶均只有单一拷贝的基因所编码,这种单一性非常有利于研究镧系元素调控甲醇脱氢酶的作用机制。

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3. 研究的方法与方案

1.研究方案 1.1mxab对mxaf和xoxf甲醇脱氢酶基因调节的分子机制研究(1)mxab的表达和纯化:用pcr 方法将mxab基因扩增并克隆至蛋白表达通用载体的pet28a( ),然后将重组质粒转化至宿主菌株e. coli bl21(de3)。

iptg诱导表达,超声破碎,获得上清。

若该蛋白形成包涵体,则采用5 m尿素洗脱复性的方法回收可溶性蛋白。

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4. 研究创新点

鉴于现今尚未对MxaB作用于甲醇脱氢酶的具体调节机制做出详细的阐述,本课题致力于弥补此方向的空缺,首次对具体的调节机制进行探索。

5. 研究计划与进展

1.研究周期2017年10月-2018年5月2.研究阶段2017年10月-2017年11月 MxaB对mxaF和xoxF甲醇脱氢酶基因调节的分子机制研究2017年11月-2018年1月 MxaB响应镧元素调节MDH酶基因表达的通路分析2018年3月-2018年5月 镧元素在5GB1中运输机制的研究

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