1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1.本课题研究意义氯代酰胺类除草剂作为一类高效的除草剂，在全球范围内广泛应用，研究表明大部分氯代酰胺类除草剂在环境中比较稳定，不易降解，使用后在土壤中和水域中残留，由此引起环境问题。
本实验材料选取了一株能高效水解cmepa的菌株delftia sp.t3-6。
本课题拟通过蛋白结晶的方法解析来源于delftia sp.t3-6的多功能酰胺水解酶damh的三维结构，将有助于揭示damh的底物选择性及多功能的催化机制，为酰胺类除草剂污染的治理提供应用基础。
2. 研究的基本内容和问题
2.1 研究目标通过对来源于delftia sp.t3-6的多功能酰胺水解酶damh表达纯化与结晶，优化结晶条件，得到其三维结构，从而为阐明其催化机制提供基础。
2.2 研究内容（1）异源表达和纯化delftia sp.t3-6的多功能酰胺水解酶damh。
（2）蛋白质结晶试剂盒进行damh结晶条件的初筛。
3. 研究的方法与方案
1. 实验方案1.1 蛋白的诱导表达将构建的表达菌株在lb固体平板画线活化，接种单菌落于5ml液体lb培养基，37℃过夜振荡培养作为种子液。
取4ml种子液转接于400ml液体lb培养基，37℃，180rpm培养至od600为0.6左右，加入1m iptg 20μl，18℃，180rpm培养24h，5,000rpm离心15min收集菌体，超声波破碎后，12,000rpm离心20min，蛋白质电泳，经考马斯亮蓝染色、脱色后观察结果。
1.2 蛋白的纯化与检测将破碎离心后的粗酶液过镍柱进行亲和层析，分别用0.05m,0.1m,0.2m,0.3m的咪唑洗脱，用1.5ml离心管收集各个梯度的洗脱液，经过蛋白质电泳，考马斯亮蓝染色后收集不含杂蛋白的收集液，合并后进行透析24h。
4. 研究创新点
特色或创新之处来源于Delftia sp.T3-6的多功能酰胺水解酶DamH具有高效降解酰胺类除草剂的能力，而在降解酰胺类除草剂方面的研究还很少，通过解析该酶的三维结构，有利于揭示酰胺类降解反应的分子机制，并为环境治理提供应用基础。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展2018年3月-2018年4月：蛋白的表达、纯化，蛋白结晶初筛；2018年4月-2018年5月：蛋白质结晶条件的优化，衍射数据采集；2017年5月：总结实验，分析数据，撰写论文
