1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
研究意义:
柑橘是世界第一大水果,第三大国际贸易农产品。在2008年,中国柑橘种植面积达3045万亩,总产量达2331万吨,第一次超越巴西成为世界第一大柑橘生产国。在我国柑橘主要是鲜销,成熟期基本集中在九月至十一月,并且柑橘的主要产区一般集中在偏远的山村或农村,在储藏和运输过程中一方面由于柑橘自身的组织生理失调或衰老、病原微生物的入侵,另一方面由于采收前后的机械损伤,运输中的碰撞等原因都会导致柑橘腐烂,营养水分的丧失,进而造成巨大的经济损失。其中真菌病害侵染是导致贮藏和运输过程中新鲜柑橘果实腐烂的最主要原因,近年来的研究发现,我国柑橘采后腐烂80%是由指状青霉(p. digitatum)引起的,其次是意大利青霉,这两种真菌侵染可导致柑橘采后腐烂率高达30%-50%。青霉主要通过空气和接触传播,基本上是从果实表面的伤口侵入。青霉的最适生长温度是26-27℃,空气湿度95%以上会更利于青霉的生长,但光照对孢子的产生数量影响不大。
化学杀菌剂虽然能一定程度的抑制p. digitatum的生长,但存在对人体的毒害性、污染和破坏环境等问题;且长期只使用一种杀菌剂容易增强病原菌对杀菌剂的抗药性,杀菌剂的防治效果也会大打折扣。绿色有机食品是今后食品发展的必然之道,因此开展柑橘类果实的采后病害生物学特性及其控制技术的研究,探索一种有效的生物保鲜杀菌方法来控制化学杀菌剂的使用成为迫切需要。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标:
本课题以corallococcussp. egb为实验材料,通过平板倒扣实验证实了其挥发性物质能够对p. digitatum的生长产生优秀的抑制作用,通过固相微萃取技术和gc-ms技术等研究手段和方法:
(1)收集并鉴定出egb挥发性物质中的各种有效成分,知道egb挥发性物质的种类。
3. 研究的方法与方案
研究方法及实验方案:
⑴采用平板倒扣法,研究egb挥发性物质对p.digitatum菌丝生长的抑制作用
采用两块无盖子的一次性平板,在下层平板上接入粘细菌egb,然后在另外一块平板中倒入pda培养基,并用牛津杯打取相同大小的含有p.digitatum菌丝的琼脂块,放置于pda平板中央,将pda平板倒扣于egb平板之上,然后用封口膜封好,放置于30℃进行培养。
4. 研究创新点
⑴在生防微生物中,粘细菌还未得到足够的重视,本研究以粘细菌为材料进行挥发性物质的研究还未见报道。
⑵粘细菌有着丰富的次级代谢产物,具有抑菌作用的挥发性物质还未见报道。
5. 研究计划与进展
研究计划:
通过固相微萃技术,将egb的挥发性物质萃取,经过气相分析,共得到了31种有机化合物,分别属于芳烃、烷烃、醚类、脂类和烯烃等。随后,在条件许可的情况下,我将分别对各种化合物进行抑菌实验和孢子萌发实验,找出能够抑制p.digitatum菌丝生长和孢子萌发的化学物,并观察在该化合物处理下,p.digitatum菌丝体的变化情况。
找出处理效果最优的化合物来处理p.digitatum菌丝体,用染料进行细胞壁染色显微镜下观察菌丝体的生长情况,通过sem等一系列技术手段,初步研究该化合物的作用机理。
