生物膜产生菌的生物学特性及其阻控青梗菜吸收铅的研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

意义：芽孢杆菌是产芽胞的杆状革兰氏阳性菌，易于生长，抗逆性强，分泌拮抗物质，利于生防菌剂生产，生物肥料堆置，运输和保藏[2]。

因为这种特性，芽孢杆菌在生物防治和植物促生方面有广阔的应用前景。

解淀粉芽孢杆菌为植物根际促生菌（plant growth promoting rhizobacteria, pgpr），在土壤分布广泛，是重要的促生和拮抗菌[1]。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：本研究利用红色荧光蛋白（red fluorescent protein，rfp）标记生物膜产生菌，重点观察几株不同的解淀粉芽孢杆菌在青梗菜根际或茎叶定殖情况，探究解淀粉芽孢杆菌生物膜形成情况，明确其是否具有很强的定殖以及拮抗病原菌的能力。

研究内容：1.将大肠杆菌带有rfp基因的质粒提取并转化至解淀粉芽孢杆菌中使其稳定表达，用荧光显微镜观察解淀粉芽孢杆菌的标记是否成功。

2.青梗菜的种植管理。

3. 研究的方法与方案

研究方法：1. rfp质粒转化方面：首先提取大肠杆菌中的rfp质粒，然后将其转进解淀粉芽孢杆菌中，用氯霉素平板和荧光显微镜进行检验；2. 青梗菜（brassica rapa l.ssp.chinensis）种植方面：用事先准备好的带有rfp质粒的解淀粉芽孢杆菌菌液对青梗菜种子浸种和幼苗灌根等方式进行接种；3. 定殖观察方面：可以用激光共聚焦显微镜进行拍照和观察。

研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析研究方法：1. rfp质粒转化方面：首先提取大肠杆菌中的rfp质粒，然后将其转进解淀粉芽孢杆菌中，用氯霉素平板和荧光显微镜进行检验；2. 青梗菜（brassica rapa l.ssp.chinensis）种植方面：用事先准备好的带有rfp质粒的解淀粉芽孢杆菌菌液对青梗菜种子浸种和幼苗灌根等方式进行接种；3. 定殖观察方面：可以用激光共聚焦显微镜进行拍照和观察。

技术路线：（不能上传图片）见附件。

4. 研究创新点

特色或创新之处：1. 利用红色荧光蛋白标记（RFP）来标记解淀粉芽孢杆菌，然后利用激光共聚焦显微镜观察其在青梗菜根系和茎叶定殖情况，观察具有直观性，可见性。

2. 解淀粉芽孢杆菌是普遍认为是植物促生菌菌，证明其在青梗菜根系定殖，是其发挥防御植物病害，促进青梗菜生长的重要基础。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展：1.2018.02-03 成功将大肠杆菌里带有rfp标记的质粒提取并且转入4种解淀粉芽孢杆菌。

实验进行的先期条件。

2.2018.03-04成功种植青梗菜并且进行定殖实验，同时检测不同菌株生物膜形成情况。