1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
细胞自噬是真核生物中高度保守的一类亚细胞降解途径，它通过降解细胞内组分维持细胞内生理平衡并帮助细胞度过逆境。
细胞自噬发生后，能形成一种叫做自噬小体的双层膜结构，包裹细胞质和一些受损的细胞器，最终这些自噬小体与溶酶体（酵母中为液泡）发生融合，以完成对底物的降解[1]。
细胞自噬不仅是生物体内的一种物质降解途径，同时在生物体生长发育、免疫防御、细胞程序性死亡、肿瘤抑制、神经性病变抑制等方面有非常重要的作用[2]。
2. 研究的基本内容和问题
1 研究目标通过对snare蛋白use1的研究，初步阐明use1是否影响细胞自噬及相应的调控机制。
2 研究内容（1）测定温敏突变菌株use1-10aa在适温条件下的选择性和非选择性细胞自噬的水平，并且比较分析其与wt、atg1△ 细胞自噬水平的差异；（2）检测use1-10aa菌株在适温条件下的选择性和非选择性细胞自噬的运输过程，并且比较分析其与wt、atg1△ 细胞自噬的差异；（3）克隆目的基因use1，构建重组质粒。
将重组质粒转化到wt和use1-10aa菌株中，检测对上述各种表型变化的回补情况并确定突变体自噬受阻位置。
3. 研究的方法与方案
1 研究方法1.1 获得缺陷菌株1.1.1 核苷酸引物介导的定点突变其原理是用含有突变碱基的寡核苷酸片段作引物，在聚合酶的作用下启动dna分子进行复制。
主要的过程：①将待突变基因克隆到突变载体上；②制备含突变基因的单链模板；③引物与模板退火5端磷酸化的突变寡核苷酸引物，与待突变的核苷酸形成一小段碱基错配的异源双链的dna；④合成突变链：在dna聚合酶的催化 下，引物以单链dna为模板合成全长的互补链，而后由连接酶封闭缺口，产牛闭环的异源双链的dna分子；⑤转化和初步筛选异源双链dna分子转化大肠杆菌后，产生野生型、突变型的同源双链dna分子。
可以用限制性酶切法、斑点杂交法和生物学法来初步筛选突变的基因；⑥对突变体基因进行序列分析。
4. 研究创新点
特色或创新之处 本研究阐述SNARE蛋白Use1在细胞自噬中对自噬蛋白Atg8的影响。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展2016年：12.20-12.30 阅读相关文献，撰写开题报告2017年：01.01-01.16 定点突变获取use1-10AA温敏突变菌株02.20-03.05 将GFP-ATG8和ATG9-3GFP的质粒整合到野生型和突变体基因组中03.06-03.20 跟踪Atg8运输过程以及使用Western blot法检测细胞自噬的发生水平03.21-04.07 构建回补质粒，转化04.08-04.28 回补后观察GFP-Atg8荧光变化，使用Western blot法检测自噬水平变化04.29-05.25 撰写毕业论文
