1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
研究意义 以酿酒酵母为模式真菌通过v-atpase突变体对细胞自噬正常自噬过程的影响，不同的突变体在细胞自噬过程中对细胞自噬的影响及其所表现出的表型，可以为推断v-atpase与细胞自噬相互作用的机制提供参考，进一步完善细胞自噬在细胞内的作用机制。
国内外研究动态 目前，国内外许多学者对v-atpase和细胞自噬的关系有着不少的研究。
例如，在氮饥饿条件下v-atpase功能受到抑制，导致自噬缺陷；v-atpase能调节torc1或ras的活性从而影响细胞自噬[；在β－淀粉样蛋白作用于ht22 细胞后，细胞内自噬体的形成增多，细胞内v-atpase的表达亦随之增加，在加入v－atpase酶的特异性抑制剂巴弗洛霉素后，v-atpase 表达量有进一步提高，同时，细胞内自噬体也明显增多。
2. 研究的基本内容和问题
研究目的 通过在酿酒酵母中敲除v-atpase的各个亚基，以及在单敲除的基础上进行双突变体的构建。
检测各个亚基与细胞自噬的相关性，根据相关性的大小推测v-atpase与细胞自噬的关系及其与细胞自噬相互作用的机理。
研究内容 通过荧光显微镜观察氮饥饿对gfp-atg8以及rfp-ape1定位的影响。
3. 研究的方法与方案
v-atpase双突变体的获得。
用同源重组的方法将实验室已具备的单突变体的其余亚基用hygromycin抗性基因替换，通过ypd g418 hyg筛选板筛选。
显微镜观察v-atpase突变体细胞形态结构，特别是液泡形态。
4. 研究创新点
通过敲除V-ATPase的各个亚基来探讨不同亚基对自噬的影响，以及各个亚基是否存在与其他自噬相关蛋白的互作
5. 研究计划与进展
2015年7月 选题； 2015年8月 查阅相关文献，开题； 2015年9-12月利用实验室已有的v-atpase亚基突变体进行试验，构建v-atpase亚基的双突变体。
2016年1月 确定新构建的v-atpase亚基的双突变体的正确性。
2016年2-3月 对各个突变体突变体对细胞自噬的阻碍情况；用western bolt进一步确定荧光结果。
