1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
β-1,3-葡聚糖酶在植物保护、饲料、酿酒、食品和医药工业等领域具有广泛的应用前景,因此发掘性能优良的β-1,3-葡聚糖酶具有十分重要的意义。本课题在前期筛选获得的β-1,3-葡聚糖酶基因lamc基础上,构建其gst和sumo双标签融合表达系统,为高效表达重组可溶性的lamc蛋白提供一条新的途径。
β-1,3-葡聚糖酶参与了植物的多种生长发育过程,包括细胞分裂、小孢子发生、花粉萌发、育性、韧皮部胼胝质去除、受精、种子萌芽及植物生长调控等过程。20世纪70年代以前,对β-1,3-葡聚糖酶的研究主要集中于它对植物本身不同发育阶段的作用,随着分子生物学技术在植物抗病基因工程中的逐步应用,β-1,3-葡聚糖酶基因的抗病研究取得了快速发展。目前,β-1,3-葡聚糖酶基因在植物抗病基因工程研究中已被认为是最具吸引力的基因之一。目前, β-葡聚糖酶的应用已经扩展到医药、纺织、日用化工、食品发酵、废水处理、饲料等各个领域,其应用前景十分广阔。
小分子泛素相关修饰物(small ubiquitin-related modifier,sumo)是一类具有高度保守序列的低分子量蛋白。在蛋白质的融合表达中,传统融合标签有绿色荧光蛋白、谷胱甘肽-S-转移酶、二硫键形成蛋白A、硫氧还蛋白,与这些传统融合标签相比,sumo以其独特的优势得到了广泛应用。sumo具有分子小、防止蛋白降解、促进蛋白折叠、能被sumo蛋白酶1专一性识别切割并在目的蛋白上不会留下氨基酸残基等优点。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标:高效表达可溶性的重组lamc蛋白
研究内容:采用基因工程的方法将lamc和sumo基因导入pgex-4t-1载体,进行表达
拟解决的关键问题: 1、确定pcr反应体系和条件
3. 研究的方法与方案
研究方法:(1)获取lamc、sumo基因,
(2)将目的基因分别与t载体连接,
(3)转入dh5α,涂布平板,获取阳性克隆
4. 研究创新点
特色或创新之处:
本实验预期通过构建其GST和sumo双标签融合表达系统,高效表达重组可溶性的LamC蛋白。
5. 研究计划与进展
2015年9月2015年10月
查阅国内外相关的文献,设计实验方案,实验材料的收集,学习相关生物信息学软件;
2015年10月2015年12月
