1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1.课题来源、研究目的及意义：目前关于微生物脱氯降解氯代硝基苯酚（cnps）的研究报道很少。
本课题是基于从菌株22-1中克隆到的降解2,6-二氯-4-硝基苯酚（2,6-dc-4-np）的关键酶基因cnpr而进行研究的。
cnpr能参与调控将2,6-dc-4-np降解脱氯转化的过程。
2. 研究的基本内容和问题
主要研究内容： 1、2,6-二氯-4-硝基苯酚降解基因簇中转录单元的鉴定前期的研究表明2,6-二氯-4-硝基苯酚降解基因cnpabcde在基因组上分布在一起，组成基因簇。
通过cdna 5端快速扩增技术（5-race），拟测定该降解基因簇的转录起始位点， 通过反转录pcr检测的方法确定基因簇中的转录单元。
2、2,6-二氯-4-硝基苯酚降解调控基因cnpr的功能鉴定在菌株22-1降解2,6-二氯-4-硝基苯酚（dcnp）的基因簇中克隆到一个lysr家族的调控基因cnpr。
3. 研究的方法与方案
1．实验材料菌株22-1，来自于本实验室前期筛选的。
2.实验方案：（1）cnpr基因的功能验证通过对cnpr基因的敲除和互补来确定其功能 首先将cnpr基因在原始菌株22-1中敲除（利用阴性菌接合转移型质粒和sacb反向筛选标记进行基因插入失活或删除），获得cnpr缺陷型菌株。
然后借助广宿主载体pbbr1mcs-5将cnpr基因互补至缺陷型菌株中，获得cnpr缺陷互补株。
4. 研究创新点
特色与创新之处：阐明菌株22-1中CnpR调控2,6-二氯-4-硝基苯酚降解的分子机制，探讨微生物对污染物的降解利用以及对环境污染的适应机制。
5. 研究计划与进展
1.研究计划： 2015.4-2015.7 1.cnpr基因的敲除和互补，并比较突变株、互补株和野生株降解性状的差异，确定降解基因簇中转录调控蛋白cnpr的功能； 2.重组表达并且纯化cnpr。
2015.8-2015.12 1.研究cnpr的调控信号分子； 2.研究cnpr与启动子结合的精确位点以及转录单元的确定，阐明cnpr调控降解基因（cnpabc）转录的分子机制。
2016.1-2016.6 1.数据整理分析，并撰写论文。
