1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
酵母双杂交技术作为发现和研究在活细胞体内的蛋白质与蛋白质之间的相互作用的技术平台，近几年来得到了广泛运用。它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。国内外大量的研究文献表明，酵母双杂交技术既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的互作，也可以用来研究高等植物基因组编码的蛋白质之间的互作。因此，它在许多的研究领域中有着广泛的应用，例如，发现新的蛋白质和蛋白质的新功能，在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用，筛选药物作用位点及药物对蛋白相互作用影响，建立基因组蛋白连锁图，等等。本课题着眼于检验自噬体调节蛋白即rabgtpaseypt7和液泡融合调节蛋白即snare蛋白vam3与几个自噬相关蛋白之间的互作有无，这几个自噬相关蛋白包括atg6，atg14，还有vps15，vps34，vps38，是自噬过程中参与信号调控作用的蛋白，研究它们之间的互作意义在于以便完整地构建酵母细胞自噬过程中的相关蛋白之间的关系及其作用的详细机制，进一步了解酵母的基因水平的调控，更好地利用酵母为人类生产和科学研究做贡献。
主要参考文献有：
1、胡晚秋、林志祥等.hops复合体蛋白在细胞自噬过程中的功能研究.中国细胞生物学学报，2011，33（8）：855-860
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标是检验出蛋白ypt7和蛋白vam3与几个自噬相关蛋白之间的互作有无，这几个自噬相关蛋白包括atg6，atg14，还有vps15，vps34，vps38，以构建完整的酵母hops自噬途径。
本课题研究的主要内容是酵母自噬体调节蛋白即rabgtpaseypt7和液泡融合调节蛋白即snare蛋白vam3与几个自噬相关蛋白之间的互作有无，这几个自噬相关蛋白包括atg6，atg14，还有vps15，vps34，vps38，是自噬过程中参与信号调控作用的蛋白。
拟解决的关键问题有:将vam3和ypt7基因克隆到质粒上并转化到用于双杂的y187或y2hgold酵母菌株中，并同对应有atg6、atg14、vps34、vps38、vps15的酵母进行酵母双杂交以检测是否有互作。
3. 研究的方法与方案
本研究主要通过自主实验进行，辅以查阅文献资料和老师还有实验室师兄师姐的指导。主要技术路线是：pcr扩增目的基因，转化目的基因至酵母，酵母双杂交。
实验具体方案：
1、pcr扩增目的基因1.1设计引物1.2pcr反应1.2.1rtaq梯度pcr检测合适退火温度1.2.2primestarpcr扩增目的基因
4. 研究创新点
创新之处在于Vam3和Ypt7这两个蛋白与Atg6、Atg14、Vps34、Vps38、Vps15这几个自噬相关蛋白间的相互作用还未有人验证过，通过验证它们之间的互作，以便于完整地构建酵母细胞自噬过程中的相关蛋白之间的关系及其作用的详细机制，进一步了解酵母的基因水平的调控。
5. 研究计划与进展
1、2014.9-2014.10:熟练及正式进行pcr扩增目的基因
2、2014.10-2014.12：重组载体的构建和重组质粒的功能验证
3、2014.12-2015.1：转化至用于双杂的酵母，进行酵母双杂交，检验互作的有无。
