1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
螺原体(spiroplasma)是一类基本形态为螺旋形原核微生物，在一定的生长阶段或条件下，还可呈现圆形、椭圆形、丝状分枝、球状突起及串珠状等多种形态，无细胞壁，但在系统发育分析上属革兰氏阳性菌，具有滤过性，能独立生活和自我复制。基因组780-2200 kbp，基因组最小的菌株为spiroplasma platuhelix pals-1(carle et al., 1995)，最大的菌株为spiroplasma ixodetis y32t(williamson et al., 1997)。
螺原体属于细菌域(bacteria)，厚壁菌门(firmicutes)，柔膜菌纲(mollicutes)，虫原体目(entomoplasmatale)，螺原体科(spiroplasmataceae)，螺原体属(spiroplasma)。目前发现的螺原体有34个血清组，其中血清组Ⅰ有9个亚组，血清组Ⅷ和ⅩⅥ各有3个亚组，但仅38个种给与拉丁文双名并被详细描述。螺原体主要存在于昆虫体内、植物体内和植物花表面,它和宿主的关系可分为互惠共生(mutualism)、 寄生(parasitism）和共栖(commensalism)三种，其中大多数为共栖关系(clark et al., 1987; hackett and clark, 1989)。1976年，在美国maryland州首次发现由spiroplasma melliferum引起的一种蜜蜂病害螺原体死亡病(spiroplasmosis)；此后，在法国发现由s. apis 引起的蜜蜂五月病(may disease) (clark et al., 1985; mouches et al., 1983) ，这两种病害给蜜蜂养殖造成较大的损失。在国内，陈永萱等于1988年首次从患爬蜂病的蜜蜂体内分离到螺原体菌株ch-1，并对其基本生物学特性作了详细的研究(陈永萱, 1988)。
迄今为止，致病螺原体已报到过多种，其基本生物学特性也有详细研究，但致病机制方面的研究仍然很少，通过测定的我国寄生蜜蜂引起爬蜂病的主要病原spiroplasma melliferum ch-1基因组草图，并与已发表的螺原体菌株spiroplasma diminutum cuas-1 、spiroplasma taiwanense ct-1、spiroplasma melliferum ipmb4a、 spiroplasma. citri gii3-3x 、 spiroplasma. melliferum kc3基因组序列比对，推测蜜蜂螺原体中可能存在的几种致病因子，例如粘附相关蛋白基因arp-1、arp-2，几丁质酶基因、几丁质脱乙酰基酶基因、信号识别颗粒p54蛋白基因等，但这些因子在致病过程中的确切作用有待进一步研究。其中s. melliferum存在两种特有的致病因子几丁质酶和几丁质脱乙酰基酶基因，在已测序并报道的其他螺原体基因组中并未发现与这两个酶有关的基因(lowen-sui et al., 2013)。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：
本项目在研究我国蜜蜂螺原体种类和致病性以及测定了蜜蜂螺原体s. melliferum ch-1的全基因组序列（草图）与功能注释的基础上，通过生物信息学分析克隆表达出与致病性相关的chia基因编码的几丁质酶蛋白，并进行诱导、纯化等的研究，有利于我们进一步了解几丁质脱乙酰基酶在螺原体致病过程中的作用，并通过控制几丁质脱乙酰基酶的方法来生物防治蜜蜂的螺原体死亡病。
研究内容：
3. 研究的方法与方案
研究方法：
1、螺原体ch-1基因组中几丁质酶相关基因的克隆表达
（1）用ctab/nacl法提取螺原体ch-1的基因组，根据基因序列，用primer5设计带有酶切位点和保护碱基的引物，overlap extension pcr(oe-pcr)扩增chia基因。
4. 研究创新点
特色或创新之处
我国在动物支原体(mycoplasma)和植物支原体(植原体phytoplasma)已有较深入的研究，对于同属柔膜菌纲的导致中华绒螯蟹颤抖病的螺原体spiroplasma eriocheiris也取得突破性进展，但是对于蜜蜂螺原体s. melliferum的致病机理研究却很少，研究力量十分薄弱。
通过本项目可以进一步揭示蜜蜂螺原体的致病机理，为蜜蜂螺原体病的诊断和防治提供科学依据，同时也将加强我国螺原体的研究，特别是蜜蜂螺原体中几丁质酶的作用以及与宿主互作的研究将更加深入。
5. 研究计划与进展
进度安排
2014年9月－2014年10月 查阅资料、文献了解螺原体；基本实验操作的学习；利用实验室已有菌株进行基础实验。
2014年10月2014年11月 螺原体ch-1几丁质酶基因的原核表达。
