Cu2 胁迫下灵芝胞内NO信号变化对灵芝生长代谢的影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义

灵芝是一种大型真菌，属担子菌纲、多孔菌科、灵芝属（ganoderma），是我国的一种传统的名贵药材，在民间有悠久而广泛的应用，中医学认为它起滋补强壮、扶正固本的作用。灵芝对人类健康的作用也日益受到国际上的重视，灵芝的改良与培育受到越来越多研究者的关注。

cu² 作为土壤中最常见的金属元素之一，本课题预利用cu² 胁迫灵芝生长，初步了解灵芝在cu² 胁迫下的各项生理生化指标的变化，探讨cu² 胁迫影响灵芝生长的具体途径，为全面研究cu² 对大型真菌的生长发育影响积累材料数据。

2. 研究的基本内容和问题

1研究目标

通过研究cu² 浓度对灵芝菌丝生物合成代谢的影响，探讨在cu² 胁迫下灵芝no信号合成的途径，为阐明cu² 胁迫下no的含量变化影响灵芝各生物合成的分子机制奠定基础。

2研究内容

3. 研究的方法与方案

1研究方法

1.1采用摇床培养法培养液体菌种。液体培养基培养灵芝，添加不同浓度的Cu² 处理，测定灵芝三萜产量的变化。

1.2采用平板培养插片观察菌丝形态、生长速度及分叉；采用荧光染色观察菌丝胞内NO产生量，建立Cu² 与NO变化之间的联系。

1.3对菌株G20基因进行Blast比对分析；分析出NO合成途径中的关键基因。

1.4采用RT-PCR测定NO相关基因的表达，构建相关基因沉默子及过量表达转化子，进一步确定Cu² 胁迫下NO的产生途径以及其对灵芝合成代谢的作用。

2技术路线(可见附件)

3可行性分析

3.1在本实验室之前的研究中，在证明茉莉酸甲酯处理影响灵芝次生代谢及三萜类物质合成中，灵芝体内ROS及NO水平提高。因此认为在灵芝中，NO作为重要的信号分子，参与了灵芝中其他的生理生化进程。

3.2该实验室拥有完备的测定灵芝各合成代谢产物的实验体系，生科院实验中心有荧光显微设备，菌丝胞内NO观察已有成熟的方法，可满足实验需求。

4. 研究创新点

本实验系统地研究了Cu² 胁迫对灵芝NO合成的影响，对由Cu² 引发的NO信号变化与灵芝合成代谢的关系进行了初步探讨，初步建立灵芝合成代谢与Cu² 胁迫及NO之间的联系模型。

5. 研究计划与进展

1研究计划

1.1 2014.09-2014.10

查阅资料，整理实验思路，准备实验器材