1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
意义
和厚朴酚(honokiol， hnk)是从厚朴中分离的带有烯丙基的连苯二酚类化合物，具有多种药理作用。在肿瘤防治方面，hk在体内外对多种肿瘤具有诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤转移、抑制肿瘤血管形成和诱导肿瘤细胞分化等作用。细胞的死亡形式分为凋亡性程序性细胞死亡(apoptosis)、自噬性程序性细胞死亡(autophagy)和细胞坏死(necrosis)三种类型。目前已有报道部分抗肿瘤药物可以通过影响细胞自噬过程调控抗肿瘤效果。三氧化二砷作用于恶性神经胶质瘤细胞时，可导致 g2/m 期滞留和自噬性细胞死亡。采用喜树碱处理的mcf7细胞，24 小时内细胞中有自噬泡样结构出现，并聚集于线粒体; 而自噬抑制剂可促进线粒体去极化并且提高胱天蛋白酶 -9的活性，并加速凋亡，提示自噬可延迟凋亡，将自噬抑制剂联合传统的化疗药对早期乳腺癌的治疗可能是一种潜在的方法[1]。和厚朴酚对革兰氏阳性菌、耐酸性菌、丝状真菌有显著的抗菌活性，对变形链球菌有更加显著的抗菌作用，对葡萄球菌的抑制作用最强。本研究以单细胞模式生物酵母菌为材料，探讨和厚朴酚是否通过影响细胞自噬过程调控酵母菌的生长及死亡，对阐释和厚朴酚的药理作用及进一步开发利用具有重要的理论意义及应用价值。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标
通过检测对和厚朴酚敏感性不同的几株酵母菌株中细胞自噬情况的差异，来揭示和厚朴酚可能通过调控细胞自噬影响菌体生长及死亡的机制。
3. 研究的方法与方案
研究方法
1） 荧光蛋白标记
2） 荧光观察
技术路线
实验方案
一， 整合绿色荧光蛋白GFP-Atg8
1，SnabI酶切
1.1 培养含pYH233（用于整合GFP-Atg8到染色体上）的大肠杆菌，提取质粒
1.2 酶切
用SnaB I酶3ul 、Basal Buffer 15ul 、0.1% BSA 15ul、pYH233质粒75ul、蒸馏水 42ul进行酶切，37度，2-3h
1.1 纯化酶切产物，琼脂糖电泳检测
2，整合
2.1 培养酵母菌野生型和突变体
2.2 50% PEG 160ul、1M liAc 20ul、10XTE 20ul、ssDNA 8ul、pYH233酶切产物8ul，与菌体混合，过夜
2.3 涂布到SD-Ura平板上生长
3，诱导自噬
2.1培养整合成功的菌株
2.2 YPD中培养6h至对数期，之后换洗培养基，在SD-N中处理2h诱导细胞自噬
2.3 观察不同菌株中GFP-Atg8的荧光分布
可行性分析：
本课题具有成熟的技术路线。在指导老师的指导和帮助以及酵母菌实验室提供的良好实验环境下，加上经验丰富的师兄师姐的帮助，完全有能力保证我们的研究内容的可实施性。这些有利条件均为本课题的顺利完成提供了保障。
4. 研究创新点
利用对和厚朴酚具有不同敏感性的酵母菌探讨和厚朴酚可能通过影响细胞自噬调控细胞生理过程。
5. 研究计划与进展
1．3-4月份进行实验，期间进行重复操作
2．5月份完成毕业论文撰写并进行答辩
