pigmentiphaga sp.中过氧化氢酶的克隆与表达开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1过氧化氢酶的概述过氧化氢酶（catalase，cat，ec1.11.1.6）的研究可追溯到19世纪初。

thenard(1811)首先发现过氧化氢（h2o2）可以被动、植物组织分解产生氧气，schonbein（1863）认为是某种酶在起作用。

1901年，loew将该酶命名为过氧化氢酶(hydrogen peroxidase)，又称触酶。

2. 研究的基本内容和问题

目标：克隆过氧化氢酶基因cate 并测定cate的酶学性质内容:1.克隆过氧化氢酶基因cate .2.构建表达载体pet29a-cate.3测定cate的温度稳定性、ph稳定性、最适反应温度、最适反应ph、金属离子对酶活的影响、有机溶剂对酶活的影响等。

关键问题：1.寻找过氧化氢酶酶活的高通量测定方式。

2.克隆过氧化氢酶基因。

3. 研究的方法与方案

研究方法：PCR、T/A克隆、重组表达等 本实验室对基因克隆表达技术成熟，关键是catE的克隆技术路线：见附件

4. 研究创新点

1. 首次从pigmentiphaga sp.中纯化到过氧化氢酶。

2. 首次从pigmentiphaga sp.中克隆得到catE基因。

5. 研究计划与进展

2013.6-2013.9 过氧化氢酶的分离纯化。

2013.9-2013.10过氧化氢酶的肽指纹图谱分析。

2013.10-2013.12 过氧化氢酶基因cate 的扩增，t/a克隆。