1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
有关内生菌的研究始于19世纪,当时国外的科学家们先后在野黑麦lollum arvers、亚麻地生黑麦l linicolum、离散黑麦lremotum和毒麦l temulentum中发现了几种内生菌。
但由于内生菌生活在没有外在感染症状的健康植物组织内部，其存在和作用长期以来一直被人们所忽视。
自20世纪30年代发现造成畜牧业重大损失的牲畜中毒是由于食用了感染内生真菌的牧草，内生菌的研究才得以广泛深入地开展起来[1]。
2. 研究的基本内容和问题
1) 研究目标：本实验的目的，是以银杏为材料，对一株产银杏黄酮内生真菌进行筛选研究并分离其高产菌株，并对其进行液态发酵优化，研究最适合其生长的培养基的成分，以及生长环境，为体外培养该菌种及其体外生产黄酮提供重要依据。
2) 研究内容：a. 从银杏内部分离出来的内生真菌中筛选产黄酮的内生真菌；b. 对其中高产黄酮的内生菌进行条件优化，寻找最适合产黄酮的银杏内生真菌的生长环境以及生长因素。
3) 拟解决的关键问题：a.如何从银杏内部分离出来的内生真菌中筛选产黄酮的内生真菌，筛选方法的选择，以及如何选取其中高产黄酮的菌种；b. 运用何种方法对其中高产黄酮的内生菌进行条件优化，并寻找最适合产黄酮的银杏内生真菌的生长环境以及生长因素。
3. 研究的方法与方案
通过对银杏不同部位分离所得内生菌进行液态发酵，对这些发酵液行银杏黄酮测定，就可以筛选出有产黄酮能力的菌株，获得银杏黄酮产生菌。
选择其中生长旺盛、抑菌效果明显、同时产黄酮能力也最强的菌株进行连续七天的培养，利用正交设计实验对该菌株进行培养条件的优化，以寻找其优化的培养条件。
2) 技术路线：a、银杏内生菌的液体培养；b、显色反应、薄层分析、uv色谱的测定、hplc-uv 测定、菌株鉴定；c、菌种筛选结果鉴定；d、黄酮的测定、生物量的测定、培养条件的优化、发酵培养基的优化。
4. 研究创新点
对于次生代谢物质的分离，首先就是要对其性质有初步的了解，现阶段对微生物次生代谢物质的分离采用的方法都是基本相同，唯一不同的是所要分离纯化的物质性质不同，在分离纯化过程中处理不一样，但是不管怎样，其分离的原理是一样的，其基本的步骤差不多，对活性物质基本性质的初步研究，然后根据这些性质进行分离方法的选择。
本研究的内生菌次生代谢物质是银杏黄酮，所以根据银杏黄酮的性质进行次生代谢物质分离检测方法的选择。
银杏黄酮的检测方法有很多，本试验就选择了最常用的四种方法，即显色反应、薄层层析（tlc）、uv 色谱的测定法和 hplc-uv 测定法。
5. 研究计划与进展
2014年02月-2014年03月1.本实验银杏内产黄酮内生真菌的采集与筛选；2.内生真菌的培养以及分析及鉴定；3.黄酮高产菌株的筛选分离。
2014年03月-2014年05月1.菌株样品的产黄酮测定；2.菌株样品的生物量测定；3.菌株培养条件的优化；4.菌株液态培养所需的发酵培养基的优化；5.整理实验数据，撰写结题报告和论文。
