血红素单加氧酶HO-1在灵芝三萜生物合成调控中的作用分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

灵芝(ganoderma lucidum）隶属非褶菌目(aphyllophorales)灵芝科(ganodermata-ceae)灵芝属真菌，在我国有悠久的药用历史。

灵芝三萜是灵芝的主要药用成分，目前已发现大约有二百种，具有较广泛的药理活性。

灵芝的次级代谢产物，尤其是三萜类灵芝酸为保护肝功能的主要成分，具有强烈的药理活性。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：通过平板试验与液体发酵试验，探究ho-1的表达与灵芝菌丝生长速率、形态及其次生代谢产物含量之间的内在关联，并推测其反应路径。

研究内容：1、 外源添加不同浓度h2o2，分别进行平板与发酵试验，测定菌丝生长速率（菌落直径）、观察菌丝形态，测定灵芝三萜含量、ho-1转录水平表达量并筛选出最佳诱导条件。

2、 外源添加不同浓度ho-1诱导剂hemin，分别进行平板与发酵试验，测定菌丝生长速率（菌落直径）、观察菌丝形态，测定灵芝三萜含量、ho-1转录水平表达量并筛选出最佳诱导条件。

3. 研究的方法与方案

在外源添加H2O2、诱导剂及抑制剂条件下，HO基因表达对灵芝生长与代谢的影响及其内在联系。

技术路线见附件

4. 研究创新点

血红素加氧酶HO-1在动物病理及植物抗胁迫中的的生理功能及作用机制已有一定深度的研究，但在真菌，尤其是灵芝体内的作用与路径尚不清晰，本实验的目的在于初步探究血红素加氧酶HO-1对灵芝生长、形态及其次生代谢产物含量的影响，并尝试构建HO基因沉默载体以进一步了解其生理机制。

5. 研究计划与进展

2014年2月-2014年3月：查阅相关文献，确定实验方案；2014年3月-2014年4月：在外源添加H2O2、Hemin、ZnPP条件下测定HO在转录水平的表达量及三萜含量，同时尝试构建HO沉默载体；2014年4月-2014年5月：整理数据，撰写论文。