1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
课题意义：沙门氏菌是一群寄生于人和动物肠道内的革兰氏阴性杆菌，对绝大多数人和动物有致病性。
作为一种常见食源性致病菌，污染蛋类、畜禽肉、生鲜奶等多数动物源性食品的情况非常普遍，并且也广泛存在于自然环境中，是微生物引起食源性疾病最多的一种致病菌。
沙门氏菌检测是诊断和防治沙门氏菌病的重要环节，目前已经制定、颁布有相应的国内外检验标准。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：研究不同食品基质对其中沙门氏菌的核酸提取的影响，以此寻找最适用于各种基质的沙门氏菌的核酸提取方法，并在该方法的基础上，用分子生物学手段对沙门氏菌进行检测。
研究内容：用现有的多种核酸提取方法对沙门氏菌的纯菌液对纯菌进行核酸提取，并用实时荧光pcr进行检验，根据ct值反应核酸提取率。
提取方法有：煮沸裂解法，离心过柱法，磁珠法，沉降法以及美国福帝斯公司新研发的纸片法，结合核酸提取率，耗时长短，操作难度，成本高低，分析出最适合于的核酸提取方法。
3. 研究的方法与方案
研究方法：依次通过前增菌、增菌对样品进行处理，并对处理结果进行pcr检测，检测样品的阴阳性，对阴性样品进行沙门氏菌纯菌的不同浓度菌液的布菌，并用沙门氏菌纯菌作为阳性对照，分别用过柱法、磁珠法对上述处理的样品进行核酸提取，并用实时荧光pcr对获得的核酸样品进行检测，根据其ct值判断其核酸提取率。
技术路线：前增菌→增菌→样品阴阳性鉴定→阴性样品→纯菌稀释液布菌→不同方法提取沙门氏菌核酸→实时荧光pcr鉴定实验方案：1. 取25g或25ml样品，加入225ml缓冲蛋白胨水，进行前增菌，37℃培养20小时；2. 取1ml前增菌液，加入10ml亚硒酸盐培养基，选择性增菌，37℃培养20小时；3. 取1ml增菌液，在12000 rpm/min 下离心，提取核酸，检测样品的阴阳性；4. 取沙门氏菌菌液活化并进行梯度稀释，依次稀释至10-8；5. 取阴性样品增菌液900μl，和100 μl标准菌株增菌液混匀，震荡离心；6. 分别采用过柱法、裂解法和磁珠法提取核酸；7. 取5μl核酸提取物和20μl pcr预混液混匀，采用沙门氏菌实时荧光pcr检测试剂盒对提取的核酸进行评估。
实验的可行性：试验样品可在各食品零售店购买，取材容易，且沙门氏菌纯菌的核酸提取方式比较成熟，实验结果可用实时荧光法较为准确地反应。
4. 研究创新点
创新之处：虽然沙门氏菌纯菌的核酸提取方式的操作已经比较成熟，然而在食品检测的应用中，却没有严格规划基于各种食品基质的提取方式，因而各检测方式的应用范围并没有被划分。
本实验针对不同食品基质进行沙门氏菌的核酸提取，可以对食品检测的实际应用有着较好的指导作用。
5. 研究计划与进展
研究计划首先采用过柱法、沉降法、裂解法和磁珠法对沙门氏菌的纯菌进行核酸提取，通过实时荧光pcr法对提取的核酸进行评估，选取适合沙门氏菌的核酸提取方式。
按照国家食品安全标准gb 4789.4-2010对检测样品进行增菌，然后利用实时荧光pcr方法对增菌液进行快速筛选，对阴性试验样品进行确认，用于后期实验。
将沙门氏菌进行纯菌活化，并依次进行10倍稀释，将10-510-7的稀释菌液均匀涂布于胰蛋白大豆琼脂，34℃下培养24h后计数取其平均值。
