大豆血红素加氧酶基因的克隆和原核表达开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

血红素加氧酶(heme oxygenase,简称ho)是催化血红素降解的微粒酶系统，目前发现它有三种同工异构酶ho-1、ho-2和ho-3。

近年来有关植物体内ho的研究发现表明，ho具有抗炎症、抗氧化、抗凋亡、抗增生效应,而且在免疫，细胞调节和信号转导方面也起着重要作用。

目前许多体外研究证明，高等植物ho1在非生物胁迫下具有保护作用，但是植物体ho/co系统可能存在的信号转导途径，以及与各种植物激素之间的交谈机制仍然不清楚。

2. 研究的基本内容和问题

1、获得大豆血红素加氧酶基因的克隆2、将克隆的基因嵌入过表达载体中3、获得原核细胞的HO过表达突变体4、探究突变体的表型变化

3. 研究的方法与方案

研究方法及实验方案：本研究根据已知的大豆血红素加氧酶基因序列，自行设计引物克隆基因，再将其嵌入至过表达载体（pmd-19t）中，转入ecoli并验证后，提取质粒酶切，通过1302表达载体再次转入ecoli中。

如时间允许，再将进一步pcr所得质粒提取转导进农杆菌eha105内，并用农杆菌侵染野生型拟南芥。

之后可得突变型拟南芥种子，进行筛选培养，并做后续表型试验，检测其根长、相关酶活性等等生理指标。

4. 研究创新点

将大豆植物体内的HO基因克隆，嵌入到原核生物中去，再探究其表型变化。

5. 研究计划与进展

研究计划：2月~3月，获得提取的大豆cDNA；3月~4月，得到相关的HO基因克隆；4月~5月，得到过表达载体并转入ecoli中；5月~6月，验证ecoli突变株HO基因的过表达。

预期进展：由于PCR、过表达载体的制备以及转导都具有一定程度的失败率，所以很可能实验进度会延长。