1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1研究意义及应用前景
基因靶向修饰技术是一种十分重要的分析基因功能的手段,不仅在生物学研究中扮演重要角色,将来也可能对治疗人类遗传性疾病发挥重要作用。因而此类技术成为分子生物学的研究热点。
传统的基因敲除方法基于基因同源重组的基因打靶技术效率极低需要通过复杂的打靶载体构建、选育等一系列步骤,不仅流程繁琐、对技术的要求很高,而且费用大,耗时较长,成功率受到多方面因素的限制。
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2. 研究的基本内容和问题
1项目研究目标:
利用crispr/cas9系统定点敲除拟南芥attlc1-2基因
2研究内容
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3. 研究的方法与方案
研究方案
1.分析目标基因,设计20bp大小的sgrna并交予相关生物公司合成。
设计要求:1正义链具有gatt和反义链具有aaac粘性末端
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4. 研究创新点
采用新方法使拟南芥AtTLC1-2基因失活
5. 研究计划与进展
1.构建作用于attlc1-2基因的crispr/cas9系统
2.转染农杆菌,用农杆菌侵染拟南芥,筛选并培养种子,得到突变株
3.培养突变株,观察并测定突变株的生理生化状态
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