拟南芥abi4基因的克隆与过表达载体的构建开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

脱落酸(abscisic acid, aba)作为一种重要的植物激素调节着植物生长发育过程中的诸多环节,比如种子和芽的休眠、气孔关闭、生物与非生物性胁迫的响应以及拮抗其它植物生长调节物质的作用等。

abi4诱导一系列aba相关反应基因的表达，影响着拟南芥的生长发育，诱导的基因功能包括种子成熟、激素应答、新陈代谢、胁迫应答、蛋白稳定、信号转导等。

abi4基因主要在发育的种子中强烈表达。

2. 研究的基本内容和问题

本实验旨在从成熟拟南芥叶片中克隆出ABi4基因，通过农杆菌介导转入拟南芥幼苗进行过表达载体的构建，从而进行更深层次的信号转导通路的研究。

实验中的关键问题在于成功提取含有ABi4基因的拟南芥幼苗的总RNA，保证其零突变，才可使后续步骤顺利进行。

3. 研究的方法与方案

2. 研究方法及实验方案2.2.1 rna的提取提取rna所用的离心管、枪头及无菌水等均经过0.2%焦碳酸二乙酯过夜处理，高压蒸汽灭菌（121 kpa, 20 min），烘干备用。

总rna的提取参照提取试剂biozol使用说明书进行。

1、匀浆：取植物材料约0.1 g，用液氮充分研磨至粉末，迅速转移至新的2ml离心管中，加1 ml biozol试剂，振荡混匀。

4. 研究创新点

有研究表明，营养生长阶段ABi4 基因转录水平较低，这是由于ABi4 受到严格的转录后调控，其调控机制可能涉及蛋白酶体，需进一步研究证实。

5. 研究计划与进展

1、重组克隆质粒pMD19-ABi4测序结果重合率100%；2、重组过表达质粒pCAMBIA 1301- ABi4成功转化野生型拟南芥幼苗。