1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
噁唑禾草灵是德国bayer公司开发的一种新型低毒防除禾本科杂草的高效茎叶选择性除草剂[1],化学名称为(r)2[4(61,3苯并噁唑2基氧)苯氧基]丙酸乙酯，属于芳氧基苯氧丙酸类除草剂，其真正起除草剂作用的结构为中间体(r)2[4(61,3苯并噁唑2基氧)苯氧基]丙酸。除草剂大量使用造成的环境污染问题日益受到人们的关注，解决污染的手段与方法不断地被提出和更新，其中利用微生物降解除草剂已成为近年来的研究热点。芳氧苯氧丙酸类类除草剂是我国除草甘膦以外，使用最多的除草剂，并且这类除草剂的品种多，使用量大；在解决了农田杂草危害的同时，也给环境带来了巨大的污染。
zablotowicz等的研究发现精噁唑禾草灵的水解途径与ph值有关，在酸性缓冲溶液中（ph值为2.6和3.6），其苯并噁唑基-氧-苯基醚键断裂，生成6-氯苯并噁唑酮，2-(4-羟基苯氧基)丙酸乙酯或者2-(4-羟基苯氧基)丙酸。在弱碱条件下，噁唑禾草灵缓慢水解生成噁唑禾草灵酸[2]。林晶等研究表明：酸和碱均能加快精噁唑禾草灵的水解；缓冲溶液对fe水解存在明显的催化作用，加快了水解速率。酸性条件下，fe水解生成了6-氯苯并噁唑酮和2-(4-羟基苯氧基)丙酸乙酯，碱性条件下，水解生成了精噁唑禾草灵酸，中性条件下，水解生成了以上三种降解产物[3]。赵莉等研究表明，氰氟草酯在酸性条件下比较稳定，在微酸性及中性条件下水解速度加快，在碱性条件下水解迅速；温度升高水解反应加速。水解产物主要是(r)-2-[4(4-氰基-2-氟苯氧基)苯氧基]-丙酸、(r)-2-[4(4-羧基-2-氟苯氧基)苯氧基]-丙酸和(r)-2-[4(4-氨基甲酰基-2-氟苯氧基)苯氧基]-丙酸[4]。
smith-grenier和adkins从曼尼托巴的土壤中分离到能以禾草灵为唯一碳源和能源生长的chryseomonas luteola和sphingomonas paucimobilis纯培养。利用气相色谱分析表明，chryseomonas luteola可以在71 h内将1.5 μgml-1禾草灵完全降解为禾草灵酸和4-(2,4-二氯苯氧基)苯酚。这些代谢产物的积累导致菌株停止生长，表明在有禾草灵酸存在的条件下，菌株不能降解苯氧基苯酚。sphingomonas paucimobilis可在54 h内矿化1.5 μgml-1禾草灵为禾草灵酸，双相生长模式表明该菌株可以将禾草灵酸降解为4-(2,4-二氯苯氧基)苯酚、2,4-二氯苯酚和苯酚。但两个菌株均不能以2,4-二氯苯酚作为唯一的碳源和能源生长[5,6]。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：
克隆2a5cp双加氧酶基因cdbb1b2并完成其在大肠杆菌中的异源表达。
研究内容：
3. 研究的方法与方案
研究方法：
（1）pcr技术
（2）核酸电泳技术
4. 研究创新点
创新之处：
1.首次从pigmentiphaga sp. 克隆到2a5cp双加氧酶。
2.首次研究了该类双加氧酶的异源表达并对其酶学性质进行初步研究。
5. 研究计划与进展
研究计划：
2014.9-2014.11 鸟枪法建库筛选2a5cp双加氧酶基因。
2014.12-2015.01 2a5cp双加氧酶基因cdbb1b2的克隆表达。
