1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
研究意义:本实验是以dna去甲基化分子机理为研究对象,以模式生物拟南芥为材料,用包含col-luc报告基因系统的起始材料创建突变体库进行遗传筛选,从而筛选到与dna去甲基化有关的突变体,并通过图位克隆发现新的与ros1有关的蛋白因子或新的dna去甲基化途径,来完善ros1介导的dna去甲基化过程。
国内外研究概况:1.dna甲基化(dna methylation)dna甲基化,也称为胞嘧啶甲基化,是指 dna复制后,在 dna甲基转移酶(dna methyltransferasednmt)作用下,将 s-腺甘酰甲硫氨酸(sam)分子上的甲基转移到 dna分子中胞嘧啶残基的5位碳原子上,实现对dna的修饰。
在自然界中,甲基化修饰十分常见以至于5-甲基胞嘧啶 (5mc) 被称为第五种核苷酸。
2. 研究的基本内容和问题
1.项目研究的目标(1)筛选参与DNA去甲基化的突变体(2)定位突变基因,或进一步克隆目标基因2. 具体内容:本次实验我们主要用Col-LUC系统筛选参与ROS1介导的DNA去甲基化过程的新蛋白因子。
(1)EMS诱变亲本系种子并用M2代种子做遗传筛选,筛选出低LUC荧光的单株;(2)进行初步的突变基因定位3.拟解决的关键问题:筛选并定位或克隆到 2-3 个参与 ROS1 介导的DNA 去甲基化的新突变体。
3. 研究的方法与方案
实验方案本次实验我们主要用Col-LUC系统筛选参与ROS1介导的DNA去甲基化过程的新蛋白因子。
(1)EMS诱变亲本系种子并用M2代种子做遗传筛选,筛选出低LUC荧光的单株;(2)进行初步的突变基因定位可行性分析 (1)有充足的用于EMS诱变的种子 (2)有完善的荧光筛选技术,可精确筛选到荧光降低的突变体
4. 研究创新点
本实验是以DNA去甲基化分子机理为研究对象,以模式生物拟南芥为材料,用包含Col-LUC报告基因系统的起始材料创建突变体库进行遗传筛选,从而筛选到与DNA去甲基化有关的突变体,并通过研究突变体上具体的突变基因,来完善ROS1介导的DNA去甲基化过程。
5. 研究计划与进展
研究计划2015年8月---11月 准备突变亲本系,EMS诱变,种植M12016年11月---3月 收获M2种子用于筛选 LUC 荧光降低的株系2016年3月---5月对筛选到的突变体进行初步基因定位2016年5月---6月撰写论文,准备论文答辩。
预期进展筛选并定位或克隆到 2-3 个参与 ROS1 介导的DNA 去甲基化的新突变体。
