1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1. 课题意义
现有数据显示mir-210和许多种癌症相关，主要体现在mir-210表达变化[1-7]：多为上升，少数癌症中下降，但mir-210具体的作用、机制均不明了。mir-210可能影响癌细胞的生长，也有可能（同时）调节癌细胞的转移，因为肿瘤转移和细胞对缺氧的反应关系密切，而mir-210是在缺氧条件下唯一一个普遍上调的mirna。肿瘤转移通常是癌症晚期的根源、症状，也是最难治疗的一步，因此，研究mir-210在癌细胞中的作用意义重大。构建mir-210缺失的癌症细胞系还将为研究mir-210的靶基因、机理、对缺氧反应的贡献等提供关键的实验模型。
2. 研究现状
2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标
这一项目的研究旨在回答这一问题：mir-210突变导致其表达、功能上的缺失对人的癌细胞的生长和转移有何影响？成果将揭示mir-210人类癌症中的作用、机理，为未来研究、检测、抑制肿瘤发生和转移提供理论基础与新的思路和手段。
2. 研究内容
3. 研究的方法与方案
1. 确定待敲除基因的靶位点
将待敲除位点设计在编码成熟microrna的外显子或在编码成熟microrna的外显子的5和3侧翼序列。
2. 设计识别mir-210靶位点的一对dnaoligos
4. 研究创新点
本课题原创性强，设计充分考虑到申请项目的经费规模,研究思路和步骤简炼, 但意义重大。采用最新最好的基因剪辑技术,在人的癌细胞内高效地突变miR-210基因，构建基因突变的细胞模型，这样可以节约大量的时间、人力、物力、财力。然后在免疫缺陷性小鼠系统中研究这些细胞在体内的生长和转移，又将快速有效地鉴定miR-210在癌细胞中的功能。因此，可以在最短时间内对miRNA及癌症同时进行深入的基础研究，并获得成果，填补目前世界上对miR-210在癌症领域研究中的空白，并为未来的工作提供新的实验模型和理论依据。
5. 研究计划与进展
1. 研究计划
用crispr-cas9系统研究mir-210在癌细胞中的功能
使用crispr-cas9技术构建mir-210功能性缺失的癌症细胞模型。设计针对mir-210基因的特异性sgrna，用crispr-cas9系统转染有代表性的三种人类癌症细胞系：a2780（子宫癌）、h1299（肺癌）、pc3（前列腺癌），以突变mir-210基因。筛选mir-210缺失稳定的细胞系。
