1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
邻苯二甲酸酯（phthalate esters，paes）是邻苯二甲酸和不同的醇类酯化形成的一类酯类化合物。
paes具有增塑的作用，广泛应用于塑料制品中。
例如常用的聚氯乙烯塑料, 在重量上含有20-50%的邻苯二甲酸酯[1]。
2. 研究的基本内容和问题
1、研究目标1.1在e.coli（bl21）中异源表达菌株qy-1中的邻苯二甲酸双加氧酶基因pdy1.2研究邻苯二甲酸双加氧酶的酶学活性2、研究内容利用pcr技术克隆邻苯二甲酸双加氧酶基因pdy。
把双酶切过的目的基因pdy和质粒酶连重组后导入e.coli（dh5α）中扩增。
通过酶切、酶连将目的片段连接到表达载体，然后将重组载体导入e.coli（bl21）并用iptg诱导表达。
3. 研究的方法与方案
1、研究方法pcr技术用于目的基因（邻苯二甲酸双加氧酶基因）的克隆，用热激的方法将包含目的基因的重组质粒转化到感受态大肠杆菌中，通过蛋白质电泳和其他生化实验探究产物的酶学活性。
2、技术路线利用pcr扩增得到目的基因 ↓目的基因与质粒重组后导入大肠杆菌dh5α中大量扩增 ↓提取上一步得到的目的基因并与质粒重组后导入表达载体大肠杆菌bl21中 ↓收集表达产物并纯化，进行酶学活性分析（最适温度、最适ph、酶活力测定、）3、实验方案从paes降解菌pseudomonas sp.qy-1中克隆邻苯二甲酸算双加氧酶基因，把双酶切过的目的基因和质粒酶连重组后导入大肠杆菌扩增载体中。
通过酶切，酶连将目的片段连接到表达载体并导入大肠杆菌表达载体进行异源表达并纯化获得纯酶。
4. 研究创新点
本实验拟采用分子生物学的方法，从一株PAEs高效降解菌Pseudomonas sp.QY-1中克隆邻苯二甲酸双加氧酶基因pdy，导入大肠杆菌中进行异源表达并获得表达产物，再对产物开展酶学活性的研究。
为以后构建高效表达PDO的基因工程菌并投入工程化应用奠定基础。
5. 研究计划与进展
2015.122016.01：克隆邻苯二甲酸双加氧酶基因，通过酶切，酶连将目的片段连接到表达载体并导入大肠杆菌表达载体进行异源表达并纯化获得纯酶2016.022016.03：对获得的纯酶进行酶学活性的分析。
