1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等(列出主要参考文献)1896年,英国人hankin在印度河水中分离到一种抗菌活性物质,它能够通过滤膜,但非常耐热[1]。
1915年,英国的edward twort在培养葡萄球菌时也发现了水中的抗菌现象,据此提出假说,认为此现象乃某种病毒引起。
1917年,巴黎pasteur研究所的felix dherelle在培养大便中志贺菌株时,发现了菌液出现澄清透明现象,felix d'herelle将其命名为噬菌体(bacteriophage,源于希腊语bacteria和phagein即吃细菌的意思),后人称为twort-d'herelle现象[2-4]。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标、内容和拟解决的关键问题研究目标1、从生活污水和医院排放的污水中筛选、分离获得多株肺炎克雷伯菌噬菌体;2、对噬菌体进行细菌裂解能力验证,筛选具有裂解肺炎致病菌能力的噬菌体;3、对获得的噬菌体进行生理生化和分子生物学鉴定,获得该菌株的生理生化指标和分子生物学特征。
研究内容本实验拟在生活污水和医院排放的污水中,利用一系列微生物学方法筛选、分离获得多株肺炎克雷伯菌噬菌体,并对其进行分离、纯化、鉴定。
获得几株具备裂解肺炎致病菌能力的肺炎克雷伯菌噬菌体,并对其进行一系列生理生化、分子生物学的鉴定和研究,旨在揭示其具体的作用机理,并对其杀菌条件进行研究和优化,最终得到具有实际应用价值的噬菌体菌株。
3. 研究的方法与方案
研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析(一)研究方法利用一些列微生物学及分子生物学相关理论知识及实验技能,结合对肺炎病致病菌的相关研究,利用实验室条件,对生活和医院污水中的噬菌体进行筛选、纯化,通过噬菌斑实验鉴定其特异性裂解能力,挑取具有较高裂解能力的噬菌体,对其进行生理生化分析及分子生物学鉴定,并研究其对肺炎致病菌的侵染和裂解能力,最终得到具有实际应用价值的噬菌体菌株。
(二)技术路线(见附件)(三)实验方案1、采集多年排污管道中的生活污水和医院污水作为噬菌体筛选的实验材料。
2、肺炎克雷伯杆菌噬菌体的筛选、分离1)宿主菌的准备:将肺炎克雷伯杆菌(klebsiella pneumoniae,文中简称kp,实验室23株,接种于普通lb-amp平板上,37 ℃过夜培养,挑单个菌落,接种于 1.5 ml 液体 lb-amp 培养基中,37 ℃振荡培养 12-24 h(不同菌株生长速度不同), 4 ℃保存备用。
4. 研究创新点
特色或创新之处本实验的特色或创新之处在于,由于噬菌体对宿主有较为特异的选择性,因此不同环境里筛选得到的噬菌体的宿主谱存在着较为明显的环境特异性,因此在南京的不同污水排放点收集的污水,并从中筛选、分离、纯化得到的噬菌体将更加适用于当地细菌性疾病的治疗,也为世界噬菌体治疗细菌性疾病提供了更为实用的噬菌体种质资源,从而为以后噬菌体的临床治疗研究提供新的种质资源。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展2015.9~2015.10采集水样、进行试验前的准备工作;2015.10~2015.12 对不同地点水样进行噬菌体的初步筛选;2016.3~2016.4 对具备侵染和裂解能力的噬菌体进行进一步分离纯化并保存;2016.4~2014.5 挑取噬菌体进行生理生化、分子生物学鉴定的研究分析;2016.5~2016.6 数据整理、分析,毕业论文撰写及毕业答辩。
