1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
本课题意义：囊泡运输与细胞自噬对细胞代谢平衡、细胞器更新、细胞稳态维持、疾病的发生与抵抗等系列生理和病理过程有着重要作用（todde et al.,2009）。
escrt ( endosomal sorting complex required for transport，转运必需内体分选复合物)复合体是真核细胞中完成内体膜内陷以形成多囊泡体的分子机器。
部分escrt复合体亚基缺失影响细胞自噬过程。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：通过探究escrt-0复合物亚基与自噬相关蛋白之间的相互作用，确立escrt-0复合物亚基是否及如何参与细胞自噬。
研究内容： 利用酵母双杂交及双分子荧光互补技术探究escrt-0复合物亚基与自噬相关蛋白间可能存在的相互作用，并确定其作用位点，具体包括：1)检测escrt-0复合物亚基与pi3k亚基之间的互作pi3k亚基包括：vps15,vps30.vps34,vps38及atg14。
2)检测escrt-0复合物亚基与atg蛋白之间的互作atg蛋白包括：atg1, atg3, atg5-12, atg14-18, atg20-24, atg26-27, atg29, atg32-34, atg38。
3. 研究的方法与方案
4.1研究方法：分子克隆、western blot、荧光标记与基因敲除、酵母双杂交及双分子荧光互补技术等。
4.2实验方案及技术路线（见附件）4.3可行性分析1) 项目指导教师近年来从事有关细胞自噬方面的内容，已经掌握了研究细胞自噬的一些方法和技术手段，实验室中的研究生已经积累了丰富的研究经验，可提供实验帮助。
实验室设备齐全。
4. 研究创新点
创新之处：目前研究发现escrt复合物系统的主要功能是通过mvb途径降解胞内泛素标记的蛋白，催化细胞中的膜重塑事件，对于其在自噬中的功能研究较少，包括关于escrt复合物在自噬中的作用是直接还是间接的还不清楚。
本实验通过探究escrt复合物与自噬相关蛋白之间存在的相互作用及其作用位点，为研究escrt复合物与细胞自噬之间的关系提供了进一步的证据。
特色之处：本实验用到的两类实验方法酵母双杂交和双分子荧光互补技术是本课题的特色所在。
5. 研究计划与进展
本课题从2015年3月中旬开始2015年3-4月：选题，查阅文献，准备开题。
2015年5-6月：第一阶段实验：分子克隆构建pact2-hse1, pact2-vps27, pgbkt7-hse1及pgbkt7-vps27重组质粒，通过回补hse1及vps27敲除突变体验证质粒功能。
第二阶段实验：将功能正常的质粒分别转化到对应单倍体菌株（pact2质粒转入y187菌株pgbkt质粒转入y2h gold菌株），通过westrn blot检测蛋白表达。
