弯曲芽孢杆菌普鲁兰酶重组表达及酶学定性开题报告

1. 研究目的与意义

在食品加工行业中，大部分淀粉质原料中支链淀粉占总淀粉质量约为 70 %~95 %，支链的存在阻碍淀粉的分解，影响到淀粉的利用率和产品的质量。

普鲁兰酶是一类淀粉脱支酶，因其能专一性水解普鲁兰糖( pullulan，麦芽三糖以α-1，6糖苷键连接起来的聚合物) 而得名，属淀粉酶类，能够专一性切开支链淀粉分支点中的α-1，6糖苷键，切下整个分支结构，形成直链淀粉的脱支酶。

普鲁兰酶在以淀粉为原料的食品加工业中有着重要的用途，与异淀粉酶不同的是，普鲁兰酶可以将最小单位的支链分解，最大限度的利用淀粉原料，使食品质量提高，降低粮耗，节约成本，减少污染。

2. 国内外研究现状分析

普鲁兰酶结构功能的研究：不同来源的普鲁兰酶由不同环境的宿主菌产生，其酶学性质具有差异。

克隆不同来源的普鲁兰酶，进行异源表达，对这些普鲁兰酶的结构和功能进行研究，将进一步阐明普鲁兰酶的结构和功能的关系。

普鲁兰酶的蛋白质工程研究：目前蛋白质工程研究的技术手段发展很快。

3. 研究的基本内容与计划

研究内容：弯曲芽孢杆菌普鲁兰酶编码基因的克隆、重组表达及酶学定性研究计划：1.构建弯曲芽孢杆菌普鲁兰酶重组菌（基因工程构建）2.发酵（通过对菌种的发酵来得到含有普鲁兰酶的菌液）3.酶性质分析（通过实验测定酶的最适PH值、最适温度及稳定性）4.优化发酵条件获取转化率更高的酶

4. 研究创新点

目前商业化普鲁兰酶生产量较低，酶活较低，本课题的特色就是，研究弯曲芽孢杆菌普鲁兰酶的酶学性质，寻找高效经济的微生物生产高酶活的普鲁兰酶的途径，为普鲁兰酶制剂的工业化生产及应用奠定基础。