寡肽修饰载体的合成及表征开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

一、固定化酶概述酶催化具有效率高、选择性强、反应条件温和等优点，现已广泛应用于医药、食品、精细化妆品领域，但游离酶一旦离开细胞环境后稳定性迅速下降，且不能重复使用，使其在工业生产中的应用受到限制。

[1]酶固定化是将酶与固相载体结合，将游离态的酶分子束缚于载体中，这样不仅有利于稳定酶的催化构象，提高酶的稳定性，同时还有利于酶制剂的回收和产物分离，大大降低了酶制剂成本[2]。

固定化酶的制备方法很多，大致可分为吸附法、包埋法、化学交联法和共价结合法。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

一、聚氨基酸链修饰的酶固定化载体的制备通过在线工具（http://web.expasy.org/compute_pi/）设计pi 4~10、残基数6~12个的系列多肽序列；以rink amide-mbha resin为载体，采用fmoc多肽固相合成方法合成目标序列，合成步骤为：（a）向rink amide-mbha resin中加入溶剂n,n-二甲基甲酰胺（dmf），溶胀4~8 h后，抽掉溶剂；（b）按照目标肽段的氨基酸序列，依次将具有-fmoc保护基的氨基酸偶联到树脂上；偶联过程中，使用的缩合试剂为hobt（羟基苯并三唑）和dic（二异丙基碳二亚胺）的组合物；氨基酸、hobt、dic和树脂的物质的量的比为5~2：6~2：6~2：1；脱除-fmoc的方法是使用20 %v/v哌啶的n,n-二甲基甲酰胺溶液，反应8~15min。

（c）氨基酸上侧链保护基的切除。

将切割液（95%三氟乙酸，2.5%三异丙基硅烷，2.5%h2o）加入反应物中，反应2~3h后，过滤掉滤液，分别用甲醇和二氯甲烷交替洗涤4次，保证最后一遍使用甲醇进行洗涤，最后用水将其洗涤至中性，抽干。