四氢嘧啶羟化酶的纯化及性质研究开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

一、研究的背景和意义四氢嘧啶及衍生物(ectoines,ects)是嗜盐或耐盐细菌胞内合成的一类能够抵抗外界高盐胁迫的有机相容溶质(compatiblesolute),主要包括四氢嘧啶(ectoine)与羟基化四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-he)。

在高温、干旱、高ph值、高压和高盐等极端环境条件下，ects不仅能够平衡细胞的渗透压，而且对蛋白质、dna、细胞膜以及整个细胞提供抗逆协助作用。

由于ects含有一个手性碳原子，很难用化学方法合成，因此利用微生物发酵提高ects制备效率的问题受到重视。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

2.1本课题要研究或解决的问题：本课题将对已获得了的来自需盐色盐杆菌的四氢嘧啶羟化酶的基因（ectd），将其在e.coli bl21(de3)中进行表达，对四氢嘧啶羟化酶的酶学性质进行补充研究，如金属离子的耐受性、ph耐受性以及温度稳定性等进行考察，优化酶催化体系，如底物浓度、辅底物浓度、金属离子的添加量、四氢嘧啶羟化酶的添加量、最适催化温度、最适催化ph等影响因子，从而获得最佳酶催化制备羟基四氢嘧啶的工艺条件。

2.2 拟采用的研究手段： 1、查阅四氢嘧啶、羟基四氢嘧啶及四氢嘧啶羟化酶的相关资料，了解三者之间的关系及转化机理。

2、将表达的粗蛋白经镍柱亲和层析纯化，获得高纯度的目的蛋白ectd；3、从温度耐受性、ph耐受性、金属离子、动力学参数等方面研究完善酶学性质。