1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
一、本课题意义
嗜酸乳杆菌是人体肠道内重要的益生菌之一[1]，当人体肠道内具有一定量的活菌时，可以起到维护肠道健康和保持菌群平衡的重要作用[2,3]。大量科学研究证明，嗜酸乳杆菌具有改善肠道菌群平衡，增强机体免疫力，降低血清胆固醇[4]，缓解乳糖不耐症等功能，随着嗜酸乳杆菌越来越多的功能被发现，其开始广泛用于食品生产，如嗜酸乳杆菌发酵干酪、嗜酸乳杆菌发酵乳、嗜酸乳杆菌与其他菌种混合发酵的乳制品、保健奶片等[5,6]，是目前乳酸菌家族中极为重视研究与开发的益生菌之一,被视为第三代酸乳发酵剂菌种。随着国内外众多学者对嗜酸乳杆菌的生物学特性、生理功能特性及应用等方面研究的不断深入,人们越来越认识到嗜酸乳杆菌的益生特性，对其生理功能及作用机制也进行了比较全面和深入的研究。而基因组dna提取是对其生理功能和作用机制研究的基础，基因组dna提取效率和质量对分子生物学相关研究起着关键的作用。嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属，革兰氏阳性杆菌，革兰氏阳性细菌细胞壁是由一层厚且致密的肽聚糖和磷壁酸组成，而肽聚糖的肽链通过5个甘氨酸互相交联着，不易裂解，厚且致密的细胞壁对提取嗜酸乳杆菌基因组dna造成了一定的困难[7]。作为分子生物学研究的基础，细菌样品中基因组dna的浓度、纯度对后续pcr的效果会产生较大影响，更影响着q-pcr的准确性[8]。张涛涛等[9]的研究也表明不同的dna提取方法对基因组dna的质量、得率以及后续pcr扩增效果影响显著，因此，选用适宜的dna提取方法对研究至关重要。为保证后续实验顺利开展，不但要考虑dna提取得率，还要尽可能地减少dna的降解[10]，并保证不同批次dna提取效率和质量的一致。
基因组dna提取方法不同，对dna降解程度的影响也不同，因此，从各种样本中提取基因组dna的潜在困难较大[11]。目前国内外很多学者都在积极探索并研究各种高效的基因组 dna提取方法，本实验用酚氯仿抽提法和试剂盒法（细菌基因组dna提取试剂盒，天根dp302）两种不同的提取方法对嗜酸乳杆菌的基因组dna进行提取，并利one drop、琼脂糖凝胶成像检测其提取dna的得率及纯度，将提取的dna进行文库构建，用qubit荧光定量及2100 dna1000高敏片段检测测定文库质量，探究不同提取方式对后续实验的影响，以期为嗜酸乳杆菌的分子生物学研究提供参考。
2. 研究的基本内容和问题
一、研究目标
本实验将对嗜酸乳杆菌的基因组dna以不同的方式进行提取，对其提取出的dna的纯度及浓度进行比较，并把提取出的dna进行dna小片段文库构建，进行文库质检，比较其用不同方式提取出的dna对后续实验的影响，以期为嗜酸乳杆菌的分子生物学研究提供参考。
二、研究内容
3. 研究的方法与方案
一、研究方法
分别用酚氯仿抽提法和试剂盒法对嗜酸乳杆菌的基因组dna进行提取、建库，并进行核酸质控和文库质控，比较不同提取方法得到核酸的纯度及浓度及对后续实验的影响。
二、技术路线及实验方案
4. 研究创新点
1、改进酚氯仿抽提法，使之适合嗜酸乳杆菌的提取；
2、将改进过的酚氯仿抽提法与试剂盒法进行比较，并研究文库质量，探究合适的提取方法。
5. 研究计划与进展
2016.10-2017.02 查阅并整理有关资料，确定酚氯仿抽提法的具体实验方案；
2017.02-2017.05 目的菌种传代培养；目的菌种质粒提取；解析序列的筛选及鉴定；与已报导序列进行比对；与其他乳杆菌质粒进行比对，进行功能验证；
2017.05- 整理实验结果；撰写论文，准备答辩。
