1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
我国既是养禽大国，也是禽蛋生产大国，近二十年来，我国的禽蛋产量一直稳居全球前列。从来源广且廉价的蛋壳中提取蛋白不仅可以解决环境污染，还可以拓宽蛋白提取的来源，带来巨大的经济效益[1]。在当今处于可持续发展和注重环保的社会环境下，产量丰富的鸡蛋膜蛋白作为一种高营养的优质蛋白，正日益受到人们关注和研发利用。目前看来，我国这块研究方面还欠缺成熟的分离技术和搭配利用，需要进一步研发利用，变废为宝，将可持续发展道路坚持到底[2]。鸡蛋膜蛋白经水解成多肽后，具有很强的抗氧化性，有效抑制膜脂质过氧化，具有重要意义。鸡蛋膜蛋白肽是一种具有开发潜力的抗氧化肽来源，可以应用到食品及化妆品等其它领域。
到目前为止，对鸡蛋膜的应用包括吸附重金属离子、烧伤的生物敷料、酶固定化和细胞培养基质等[3]。熊曦[4]等报道了一种从天然鸡蛋壳膜中提取可溶性鸡蛋壳膜蛋白的方法，该方法通过β-硫代丙酸/乙酸的还原溶解和碱中和，得到了一种白色粉状产品，产率较高，分离得到的膜蛋白不溶于水，可以溶于酸性和碱性水溶液及六氟异丙醇等有机溶剂，扩大了应用。周艳华[5]采用二次提取法提取可溶性鸡蛋壳膜蛋白，通过单因素和正交试验对结果进行优化。结果表明二次采用胃蛋白酶提取可使鸡蛋壳膜蛋白的提取率高达75.82%，而通过二次反应可使鸡蛋壳膜蛋白的提取率高达93.62%，基本达到了全蛋壳膜利用的目的。多肽的提取方法很多，总体来讲有以下几种：a.提取法，即从富含肽的生物机体内通过不同的工艺将其提取出来，可采用盐析、层析、沉淀等物理方法，分离纯化出以天然形式存在的活性多肽。由于此方法的原料来源、种类有限，因此限制了提取法的应用范围；b.化学合成法，即把氨基酸附着在载体上，然后从氨基端或羧基端逐步增长肽链来合成所需的多肽；c.化学水解法，即以天然蛋白质为原料，经酸水解或碱水解得到多肽[6]。张娴[7]通过研究鸡蛋膜蛋白酶解法工艺条件发现，固液比对水解度和肽含量基本无太大影响，影响较大的为反应时间、反应温度、溶液和酶用量这四个因素。周艳华[8]在四个不同的化学发光体系中测定了鸡蛋壳膜蛋白及其酶解液清除超氧阴离子、羟基自由基、双氧水和对损伤的保护作用的抗氧化活性，结果表明碱性蛋白酶酶解液具有较强的抗氧化活性。杨德玉[9]等以鸡蛋蛋壳膜为原料，采用酶法提取了鸡蛋壳膜中的角蛋白，并得到了其提取的最佳工艺条件，角蛋白提取率可达26%，但并没有对此酶解液进行鉴定和相关研究。蔡婷[10]等人用角蛋白溶液处理受损头发，发现角蛋白对头发有良好的亲和作用，并能在受损头发表面形成光滑膜，修复毛小皮鳞片受损处，改善头发的光泽和弹性。周艳华[11]等采用凝胶排阻层析将碱性蛋白酶酶解液分离出三个组分sp1、sp2、sp3，采用化学分光法测定发现sp2组分具有较强的抗氧化活性，其平均分子量为618.86da，所占比例为68.15%。史雅凝[12]研究发现鸡蛋膜蛋白酶解物具有抗氧化应激和抗炎活性，可以有效保护肠道健康。该研究为探寻提高鸡蛋膜附加值的方法提供新的思路，同时为研发具有生物活性的可食性鸡蛋膜蛋白食品提供理论依据。
鸡蛋膜蛋白多肽具有许多的用途，对金属离子具有吸附作用，对日益严重的环境污染有着不可或缺的位，对降低成本也有着很大的作用[13]。在医学领域，轻工业以及食品等领域都有着很大的发展空间，是否可以应用到实际生产还只是一种猜想，还停留在试验方面，稳定性，可行性等方面都还需要很长的道路来走。相信随着研究的不断深入和技术的成熟，膜蛋白多肽关于抗氧化，吸附金属离子等领域会有着更广阔的发展和应用。
[1] 马美湖. 我国蛋与蛋制品加工重大关键技术筛选研究报告(一)[j]. 中国家禽，2004，(23):1-5.
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：鸡蛋膜蛋白经过超滤、层析分离后的不同组分的抗氧化活性
研究内容：将鸡蛋膜蛋白多肽在选定分子量范围内层析分离，测其蛋白含量及抗氧化活性并进行筛选等。
拟解决的问题：选择分子量范围较为重要，筛选有用的鸡蛋膜蛋白多肽进行研究，以及测其抗氧化实验中的条件等。
3. 研究的方法与方案
1. 将初样品通过3000g离心15分钟重复两次，收集超滤液并旋转蒸发，冻干备用。
2. 将冻干样品通过葡聚糖凝胶sephadex g-25进行层析过滤，通过紫外分光光度计测其吸光值分离出不同分子量范围的多肽，然后旋转蒸发并冻干备用。
3. 通过紫外吸收法和考马斯亮蓝法对收集的分组样品进行蛋白含量测定。
4. 研究创新点
目前关于鸡蛋膜蛋白多肽的研究较少，研究方向单一，深入程度较低，本实验旨在将不同分子量的多肽较为细致的分离，并对它们的抗氧化活性进行研究，经过DPPH法、ABTS法、FRAP法进行对比优化，择选出活性强的组分，为后续相关研究提供一个简单的参考等。
5. 研究计划与进展
2016年12月-2017年1月 鸡蛋膜蛋白多肽的分离与制备
2017年1月-2017年3月 多肽的抗氧化活性研究
2017年3月-2017年4月 整理分析数据
