1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
驱动蛋白(kinesin)是1985年由vale等从乌贼神经触突中分离出的具有atp酶活性和运动特性的马达分子，存在于所有的真核细胞中[1]。
传统驱动蛋白(kinesin 1)是异源二聚体结构，包括两条重链和两条轻链。
重链n端由345个氨基酸折叠成球状头部，其上有连接微管和结合、催化atp的位点，是产生动力的马达，重链的其余部分相互折叠成a螺旋，使得两链成为二聚体；c端结合两条轻链构成扇状尾部，是货物分子结合部位。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：驱动蛋白eg5的表达与纯化研究内容：（1）驱动蛋白eg5在菌落中的表达，寻找提高表达效率和产率的方法。
（2）驱动蛋白eg5的纯化，利用透析、层析等手段对表达的蛋白进行纯化。
研究意义：本课题目的是使人eg5基因在大肠杆菌中高效表达、纯化，为下一阶段结晶和eg5水解atp机理和eg5-抑制剂复合物晶体结构的解析打下基础。
3. 研究的方法与方案
（1）驱动蛋白eg5的表达1.从lb琼脂糖平板（含50g/ml kanamycin）中挑单菌落，接种到50ml lb培养液（含50g/ml kanamycin）中。
在37℃培养4小时直到od600值为0.3-0.8，或者25℃过夜获得饱和菌液；2.4x10ml上述菌液接种到含抗生素的4x1000ml的tb培养液（比例1：100），在37度培养3-3.5小时，直到od600为0.4-0.8；将培养液降温到22度，然后加入0.5mm iptg诱导蛋白表达，在22度左右过夜表达。
（2）驱动蛋白eg5的纯化1.菌液中的细胞在6500rpm转速离心20分钟，收集细胞并称重，放入-80c冰箱保存或直接破碎进入蛋白纯化阶段；2.按照1克细胞：5ml缓冲液的比例将细胞溶解在裂解液中。
4. 研究创新点
使用阳离子交换柱和Ni亲和层析柱进行多次纯化，提高蛋白纯度。
5. 研究计划与进展
总共分三个阶段：1.从2016年12月到2017年1月a．查阅相关文献；b．设计实验方案。
2.从2017年3月到2017年4月a. 进行实验3. 2017年5月a．撰写论文；b．进行毕业答辩。
