玉米TS2基因转基因表达载体的构建开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义

转基因技术使得单个基因的功能鉴定以及目标性状的筛选起到了关键的作用。然而，转化体系的低效率，转基因的载体匮乏使得这一技术进展缓慢。大部分可用的的载体启动子来自于双子叶植物，而这样的启动子大多不能用于单子叶作物的转基因研究，而经济作物玉米小麦等均为单子叶作物。目前单子叶转化方法主要有两种基因枪法和农杆菌介导转化法，相对来说，农杆菌转化率高，不易产生嵌合体，可用于农杆菌转化的单子叶作物载体难获得。

本文利用gateway技术构建了一系列可用于谷类作物转基因研究的载体，这套载体体系具有不同的启动子，包括玉米启动子ubi，这一系列载体的构建将大大有助于谷类作物的遗传转化研究。本实验目标基因是ts2，ts2是最早在玉米中发现的性别决定基因。玉米也是植研究植物性别决定的一个优良遗传系统，现在从雄穗种子(tasselseed)突变体中已经鉴定并分离出的玉米雄性基因有ts1、ts2、ts4、ts5和ts6。其中ts1和ts2突变体植株在雄穗中产生功能性的雌蕊,受粉后能在雄穗花序上形成有功能的种子。[1]现阶段关于玉米雄穗结实基因ts9有初步定位。主要是利用具有mu9转座子的材料和豫82杂交，从m2分离群体中得到1株雄穗结实突变株，表现型为雄穗上的雄花中雄蕊发育受到抑制，雌蕊不发生退化，雄花转化为雌花。遗传分析表明，该突变性状受1对显性基因控制，初步命名为ts9。以玉米自交系b73与突变体材料杂交构建bc1分离群体，利用ssr标记将ts9定位在第1染色体的1．09bin区域，位于ssＲ标记umc2047和umc1431之间，距这2个标记之间遗传距离分别为4.2和2.0cm。[2]

2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标

利用gateway技术构建玉米转基因载体：过表达载体

2．研究内容

3. 研究的方法与方案

1．研究方法

1.1基因克隆：pcr技术，感受态制备，热激法，转化

1.2bp反应：构建入门载体

4. 研究创新点

运用gateway技术对玉米TS2基因的转基因表达载体进行构建，而非采用其他农杆菌介导，基因枪等方式，因为gateway技术的适应性广泛，操作简便，在玉米TS2基因上面的运用也属少数。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展

1.研究计划

2015.7查阅相关文献，明确实验研究背景与意义，确定实验方案