1. 研究目的与意义
松材线虫病是目前我国林业生产上最具危险性的检疫性病害。
松材线虫对松树具有强烈的致病作用。
而与松材线虫近缘关系较近的拟松材线虫对生长衰弱的松树也有一定的致病作用。
2. 国内外研究现状分析
20多年来,松材线虫[bursaphelenchus xylophilus(steiner and buhrer) ]已扩散到我国南方多个省区,正威胁着南方3400万hm2松林和许多重要地区的生态安全,被公认为我国当前头号森林病虫害。由于其病原物松材线虫与其近缘种之间的形态学特征存在重叠及变异现象,生产上容易造成误判、漏判。在松材线虫病的防控体系中,对松材线虫的准确检测鉴定是病害监测和对疫木控制的关键。针对松材线虫形态学鉴定这一难题,近年来,许多学者一直在探索松材线虫的分子检测技术。随着分子生物学的发展,松材线虫检测鉴定技术也取得了重大突破,一系列松材线虫分子检测技术与方法如限制性片段长度多态性、随机扩增多态性、特异引物pcr、实时定量pcr、核酸杂交检测等技术相继被成功开发和应用。其中实时定量pcr检测技术与scar标记检测技术具有检测时间短、检测准确性高等优点。该两项技术已广泛应用于我国生产实践中。
目前国内外已有对松材线虫和拟松材线虫pcr和实时荧光pcr检测技术等的研究，但大多是局限于单一基因区域的扩增检测。目前国内外已开始对松材线虫病木中分离的松材线虫和近缘种的拟松材线虫双重pcr检测方法进行研究，以期建立一套更准确和灵敏度更高的松材线虫分子检测方法。
双重 pcr是指在同一 pcr反应体系里加上2对引物, 同时扩增出2个核酸片段的pcr反应。其反应原理、反应试剂和操作过程与普通 pcr相似, 并已成功用于多种生物检测。尤其是subbotin等用双重 pcr成功进行大豆胞囊线虫的快速检测, 能单条线虫检测, 同时还能检测土壤中的大豆胞囊线虫。
3. 研究的基本内容与计划
1、2013.03.18―2013.04.18：查阅文献，拟定试验方案，准备试验材料；
2、2013.04.19－2013.04.30：线虫培养；
3、2013.05.01－2013.05.13：线虫dna提取；引物设计；
4. 研究创新点
本研究提取松材线虫与拟松材线虫dna设计双重pcr检测方法。
以往的研究主要是检测、鉴定样品中是否含有松材线虫，是回答是与不是松材线虫的问题。
而本研究是在一次实验的基础上可以同时检测、鉴定松材线虫与拟松材线虫。
