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1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
蝴蝶兰因花色艳丽多样，姿态优美且花期较长而越来越受到大众追捧，是兰科植物中栽培最广泛，最受欢迎的种类之一（秦凡和周吉源，2003），在市场上的地位日益提高（黄秋婷，2008）。由于蝴蝶兰种子不含胚乳，常规条件下很难萌发（郝永丽等，2017），故多采用组织培养的方式进行繁殖，蝴蝶兰常用外植体为茎尖、休眠芽、隐芽、花梗（魏立君2016）。蝴蝶兰花粉块中小孢子数量庞大，但常规方法不易分离，若能成功分离纯化、培养生成胚状体或原球茎并诱导分化为单倍体植株不仅可以缩短蝴蝶兰自交系培育时间缩短育种周期，还能为蝴蝶兰基因转移等奠定良好基础，同时便于物理或化学诱变。在经过诱变处理后进行染色体加倍，突变性状可直接在当代植株形状上表现出来，利于提高突变体筛选率（石江鹏等，2017）。而成熟的蝴蝶兰小孢子分离技术是进一步探索其培养条件的基础。
目前，在蔬菜、作物、果树上有关小孢子培养技术的相关报道较多，如茄子、芥蓝、黄瓜等园艺植物及大麦、小麦、陆稻等农作物上取得很大进展；而在花卉、药用植物方面报道相对较少（石江鹏等，2017）。蝴蝶兰小孢子分离及培养国内外尚未见报道，但同为单细胞蝴蝶兰原生质体分离及纯化已有少量报道（乔永旭等，2008），故可为小孢子的分离纯化方法提供参考。
大部分兰科植物花粉为复合花粉，胡适宜等（1989）在关于春兰的研究中认为兰科植物花粉粘结为花粉块可能是由于四合花粉间存在粘性物质、细胞较小并排列紧密等因素。徐是雄（1987）指出高斑叶兰四分体之间是依靠胼胝质粘结。经扫描电镜观察，蝴蝶兰花粉块花粉排列紧密但表面无明显粘接物（孙崇波，2010）。推测蝴蝶兰花粉可能也是由于细胞间紧密的排列及胼胝质等粘合物质的存在而粘合成为花粉块。由于蝴蝶兰花粉粘结成块且坚硬不易分散，故无法采用普通的分离方法如自然释放、研磨过滤收集法等直接分离。在预实验中用纤维素酶和果胶酶处理后的花粉块可以达到良好的分离效果，因此本课题拟以蝴蝶兰品种‘little gem stripes’为材料，研究花粉采集时间、不同酶液浓度组合、处理方法及处理时间长短对蝴蝶兰小孢子的分离情况的影响，为蝴蝶兰小孢子培养的研究奠定基础。
2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标
（1）建立和优化蝴蝶兰小孢子分离和纯化条件；
2. 研究内容
3. 研究的方法与方案
1.研究方法
收集蝴蝶兰品种‘little gem stripes’不同开花时期的花粉块，采用酶解法及机械法对蝴蝶兰小孢子进行分离纯化并比较两者效果。
2.实验方案及可行性分析
4. 研究创新点
（1）采用酶处理的方法分离蝴蝶兰小孢子；
5. 研究计划与进展
2018年 3月- 2018年6月
比较不同开花时期对小孢子分离情况的影响；
2018年7月- 2018年11月
