梅果实中羟基柠檬酸（HCA）的积累变化规律开题报告

全文总字数：6260字

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.意义

梅（prunusmlzmesieb．etzuc）为蔷薇科(rosaceae)李属(prunus)植物。其花可提取香精，花、叶、根和种仁均可入药；其果可食、盐渍或千制，或熏制成乌梅人药，有止咳、止泻、生津、止渴之效。梅是一种含酸量极高的果实，营养丰富，深受消费者喜欢。

(-)-羟基柠檬酸(hydroxycitric acid,(-)-hca)是一种柠檬酸的衍生物，hca异构体中的一种：(2s,3r)-hca。广泛存在于印度次大陆和斯里兰卡西部的藤黄属植物(garciniacambogia)的果实外壳中，在木槿（hibiscus）属植物也有存在^[1]。它是由多元醇和多元酸组成的高活性分子，既可制备单位分子中高钙盐、高钾盐的保健品，又可利用其多活性功能团制备某些新药的前药中间体。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标

采摘不同生长时期和不同品种的梅果，通过高效液相色谱法分别测定梅果中羟基柠檬酸含量，从而明确羟基柠檬酸在梅果中的动态积累规律，筛选出最适宜的采摘时期，并为实践生产提供坚实的理论依据。

2.研究内容

3. 研究的方法与方案

1.研究方法

1.1 梅果发育动态变化

在果实成熟后进行采摘，每隔7天采摘一次。品种分别为青梅‘养老3’、‘龙眼’和‘长农17’以及红梅 ‘南红’、‘软条红梅’和‘小叶猪肝’。每次从树的不同部位取6至10个大小长势基本一致且无病虫的果实。用游标卡尺记录横、纵、侧径，并用天平记录单果重。并用液氮低温处理后，放于-20℃冰箱保存。

1.2 羟基柠檬酸含量的测定

取冰箱中保存好的果实，用高效液相色谱法分别测定梅果中羟基柠檬酸含量。研究羟基柠檬酸在梅果中的动态积累变化，并筛选出最优提取时间及品种。

2.技术路线

3.实验方案

3.1 植物材料

试验材料为国家果梅杨梅种质资源圃的青梅品种‘养老3’、‘龙眼’和‘长农17’以及红梅品种‘南红’、‘软条红梅’和‘小叶猪肝’。

3.2 实验试剂

羟基柠檬酸、为色谱纯，草酸、甲醇为分析纯，羟基柠檬酸购自寿德试验器材有限公司，草酸、甲醇均购自Sigma公司，其他药品为常规的化学试剂。

3.3 样品采集

根据果实的不同生长周期分别取样，将其生长周期分为三个阶段。第Ⅰ阶段为第一次快速生长期，于2017年4月8日、4月15日、4月22日采样；第Ⅱ阶段为生长缓慢期，即为硬核期，于4月29日、5月6日采样；第Ⅲ阶段为第二次快速生长期，生长速度再次加快，直至成熟，于5月13日、5月20日采样；最后一次5月27日的采样为生理成熟期。每次从树的不同部位取6至10个大小长势基本一致的果实。

3.4 指标测定

果实大小及质量的测定：用游标卡尺测定纵径、横径、侧径，并用分析天平测定单果重，取其平均数。

羟基柠檬酸的提取：称取－70 ℃条件下保存的样品放入研钵中，用液氮磨碎，用分析天平称取2 g粉末状的果肉，放入10 mL离心管中，加入提取液（超纯水），75 ℃水浴加热30 min，超声波提取30 min，再离心（4 ℃，,4000 r，15 min），把上清液转到10 mL的容量瓶中，重复提取3次，定容，然后装入新的10 mL离心管中，放入4 ℃冰箱中备用。用针管取1ml样品并用0.22 μm滤膜过滤后，加入液相瓶中，进行HPLC分析。

羟基柠檬酸的测定：羟基柠檬酸含量测定的色谱条件：色谱柱为Waters AtlantisT3柱（4.6×150 mm，1.8 μm），流动相为1 %的甲醇和99%的0.1 %磷酸水溶液，流速为0.6 ml/min,柱温30 ℃，紫外检测器，检测波长为210 nm，进样量2 μL，根据峰面积和标准曲线计算有机酸含量。

3.5 统计与分析

运用EXCEL软件对数据进行统计分析，用Excel做图，进行相关性分析。

4.可行性分析

4.1本项目是在大量阅读相关文献、认真分析前人研究资料和老师分析指导的基础上展开的，项目具有一定创新性，且整个研究过程技术线路合理，目标明确，因此在理论上是可行的。

4.2课题组实验室具有从事相关实验研究等各种必要设备与实验条件。

4. 研究创新点

1. 羟基柠檬酸在梅果中含量的动态积累变化国内外尚末见报道，具体仍需要进一步的实验研究。

2. 羟基柠檬酸可以调节生物体脂肪代谢水平，并能溶解草酸钙型肾结石，可生产为为良好的营养品。若根据研究结果筛选出最优品种和最佳提取时期并应用于生产，可大大提高梅果的经济价值和生产价值。

5. 研究计划与进展