全文总字数：4387字
1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1.1国内外研究进展
1.1.1森林草莓简介
森林草莓为二倍体，具有基因组小（约 240m），生命周期短（3.5—4 个月），遗传转化较容易等特点，在对多种草莓的核型分析中，森林草莓核型不对称系数最高，故其核型对称性最低[1]。是蔷薇科植物基因功能研究的理想模式植物。
2. 研究的基本内容和问题
2.1研究的目标
（1）探究ddm1对草莓愈伤组织形成的影响；
（2）探究ddm1对草莓芽分化的影响。
3. 研究的方法与方案
3.1研究方法
使用森林草莓野生型‘Ruegen’的叶片和DDM1被选择性沉默的FveDDM1 RNAi转基因植株的叶片作为外植体，切叶片，在叶片上划伤口，放在培养板上，培养愈伤组织，观察愈伤组织生长的情况，并比计较愈伤组织的大小，形状。后移入生芽培养基，记录生芽的情况。
3.2技术路线
3.3实验方案及可行性分析
3.3.1外植体的准备
消毒灭菌：取适量的饱满的Ruegen草莓种子和敲除了DDM1基因的Ruegen草莓种子分别放于干净的5mL离心管中。在超净工作台上，分别加入3 mL 75%的酒精，震荡30 s后，用移液枪将酒精全部吸出，再向离心管中加入3 mL ddH2O进行洗涤，重复2~3次（去除多余的酒精），然后，加3 mL 10%次氯酸钠（次氯酸钠见光易分解，注意避光保存），震荡8 min，再用ddH2O清洗6~7次（目的是尽可能去除残留的次氯酸钠）。将消毒的种子置于灭过菌的滤纸上，用在酒精灯上灼烧过后冷却的镊子在每一个组培瓶中（MS固体培养基配好后分装到组培瓶中）种植4-5粒种子，先于暗处28℃培养一周，待发芽后，转移到组培室里，光下培养。培养35 天左右，取生长状态一致的幼嫩叶片作为外植体进行实验。
3.3.2培养基的准备
选择以MS-B5 2mg/L TDZ 0.2 mg/L IBA为基础的生长培养基。
可行性分析
本实验的指导老师顾婷婷，具有丰富的教学经验和科研经历，在实验过程中可给以技术指导。所在实验室已有多个转基因草莓株系，而且目前生长良好，可以为本试验提供材料；此外，实验室已开展草莓组织培养研究多年，已建立草莓外植体的离体再生体系。实验室已有很多关于草莓表观遗传的成功实验，在此基础上探究DDM1和DNA甲基化对森林草莓野生型‘Ruegen ’
愈伤组织形成和芽分化的可能的影响，可行性极高。
3.3实验方案及可行性分析
3.3.1外植体的准备
消毒灭菌：取适量的饱满的Ruegen草莓种子和敲除了DDM1基因的Ruegen草莓种子分别放于干净的5mL离心管中。在超净工作台上，分别加入3 mL 75%的酒精，震荡30 s后，用移液枪将酒精全部吸出，再向离心管中加入3 mL ddH2O进行洗涤，重复2~3次（去除多余的酒精），然后，加3 mL 10%次氯酸钠（次氯酸钠见光易分解，注意避光保存），震荡8 min，再用ddH2O清洗6~7次（目的是尽可能去除残留的次氯酸钠）。将消毒的种子置于灭过菌的滤纸上，用在酒精灯上灼烧过后冷却的镊子在每一个组培瓶中（MS固体培养基配好后分装到组培瓶中）种植4-5粒种子，先于暗处28℃培养一周，待发芽后，转移到组培室里，光下培养。培养35 天左右，取生长状态一致的幼嫩叶片作为外植体进行实验。
3.3.2培养基的准备
选择以MS-B5 2mg/L TDZ 0.2 mg/L IBA为基础的生长培养基。
可行性分析
本实验的指导老师顾婷婷，具有丰富的教学经验和科研经历，在实验过程中可给以技术指导。所在实验室已有多个转基因草莓株系，而且目前生长良好，可以为本试验提供材料；此外，实验室已开展草莓组织培养研究多年，已建立草莓外植体的离体再生体系。实验室已有很多关于草莓表观遗传的成功实验，在此基础上探究DDM1和DNA甲基化对森林草莓野生型‘Ruegen ’愈伤组织形成和芽分化的可能的影响，可行性极高。
4. 研究创新点
本实验中，我们分别使用森林草莓野生型‘ruegen’的叶片和ddm1被选择性沉默的fveddm1 rnai转基因植株的叶片作为外植体培养愈伤组织，通过比较两者形成的愈伤组织的大小、形态，以及芽的数量，来探讨ddm1和dna甲基化对森林草莓野生型‘ruegen ’ 愈伤组织形成和芽分化的可能的影响。
选择以ddm1被选择性沉默的fveddm1 rnai转基因植株叶片作为外植体，利用以培育出的稳定遗传的转基因株系，并以此作为进一步实验的材料，是本实验的特色。
探究ddm1对愈伤组织以及芽分化的可能影响，有利于探究草莓的分化机制，也有利于草莓的生产，不但具有理论价值，更具实际意义，这也是实验的特色之一。
5. 研究计划与进展
2018年5月—2018年6月：学习相关知识，阅读相关文献；
2018年8月—2019年2月：明确实验方法，进行具体实验；
2019年3月—2019年5月：实验总结、数据分析、论文撰写。
