1. 毕业设计(论文)的内容和要求
本研究在表达和纯化Ezrin蛋白的基础上,利用免疫共沉淀、免疫荧光技术及Western Blot 等技术手段对细胞学生物学表征及其磷酸化调节机理进行初步的探讨。
此外,通过本课题的研究,熟练掌握人肾源293T细胞、新西兰兔胃壁细胞的培养与传代技术、实验室基础生化实验以及免疫荧光等分子生物学实验技术;总结撰写一篇本科毕业论文。
2. 实验内容和要求
1) 鉴定ezrin磷酸化位点以及结构功能预测;
2) ezrin的原核和真核表达及其分离纯化;
3)构建模拟磷酸化突变体,并确立磷酸化表型;
3. 参考文献
1) fehon rg, mcclatchey ai, bretscher a. organizing the cell cortex: the role of erm proteins. nat rev mol cell biol. 2010, 11(4): 276-87.
2) pilot f1, philippe jm, lemmers c, lecuit t. spatial control of actin organization at adherens junctions by a synaptotagmin-like protein btsz. nature. 2006, 442 (7102): 580-584.
3) belkina nv, liu y, hao jj, karasuyama h, shaw s. lok is a major erm kinase in resting lymphocytes and regulates cytoskeletal rearrangement through erm phosphorylation. proc natl acad sci usa. 2009, 106 (12): 4707-4712.
4. 毕业设计(论文)计划
2022年11月:选题、开题,进行研究方法收集,并认真展开实验。
2022年12月-2022年1月:ezrin磷酸化结构功能预测,制备质谱样品确认磷酸化位点;
2022年1月-4月:构建ezrin蛋白表达载体(真核及原核);利用western blot、免疫共沉淀技术研究其磷酸化调节机理;利用免疫荧光技术观察ezrin蛋白的细胞定位,并对ezrin蛋白对细胞的动力学特性的影响进行初步的探讨。
2022年5月:论文修改完成,并制作幻灯片,参加答辩。
