里氏木霉木聚糖酶基因在马克斯克鲁维酵母中的表达任务书

1. 毕业设计（论文）的内容和要求

本实验利用里氏木霉外切葡聚糖酶基因，将其转化马克斯克鲁维酵母中表达，并对目的产物进行纯化以及相关酶学性质的研究分析，并得出纯化后的酶的各种参数。

2. 实验内容和要求

本工作选取马克斯克鲁维酵母作为表达系统，进行了里氏木霉木聚糖酶基因（xyn）的表达。通过人工合成木聚糖酶基因，将其插入到表达载体 pKLAC1中，得到重组质粒 pKLAC1-XYN。用 ScaII 酶对重组质粒进行线性化酶切，选取最终所需的基因片段，运用电穿孔的方法转化马克斯克鲁维酵母菌株。经过含 5 mmol /L 乙酰胺的 YCB 平板筛选后得到可以高效表达木聚糖酶的马克斯克鲁维酵母菌株。并对产物进行FPA酶活测定。

3. 参考文献

1.mccarthy t, hanniffy o, savage a v, et al. catalytic properties and mode of action of three endo-β-glucanases from talaromyces emersonii on soluble β-1,4- and β-1,3;1,4-linked glucans[j]. international journal of biological macromolecules, 2003, 33(1):141148.

2.程伟, 汤斌, 李松. 重组毕赤酵母产匍枝根霉内切葡聚糖酶Ⅱ的分离纯化及其酶学性质研究[j]. 安徽工程大学学报, 2015(2):1-5.

3.洪,黄秀梨. 纤维素酶的应用[j]. 生物学通报,1997(12):18-19.

4. 毕业设计（论文）计划

5月1日-5月10日：进行材料与方法、主要仪器和设备的准备以及菌种培养基的配制；

5月11日-5月20日：

(1)目的基因xyn的获取。