- 选题缘由
重组人源化抗PD-1单克隆抗体技术已相对趋于成熟，但相关的纯化技术重点难点分析与总结尚未见直接报道。本文拟在君实生物原研药“特瑞普利单抗注射液”的生产纯化过程中分析归纳并总结重组人源化抗PD-1单克隆抗体注射液纯化工序工艺难点及关键控制点，以期减少纯化中产生的偏差。
- 国内外研究现状
- 生物学机制
1）信号转导特点
程序性死亡蛋白１（Programmed Death-1），简称 PD-1，也称作CD279和PDCD1，是由基因PDCD1编码的Ⅰ型跨膜蛋白[1-2]，其中胞内段有相应功能域（N端ITIM和C端ITSM），对免疫负向调节起不容忽视的作用[3]。在一般生理机制作用下，PD-1蛋白能在不同类型的免疫细胞表面表达下降[3-4]。当T细 胞PD-1共刺激信号激活之后，PD-1表达量上调。
2）免疫逃逸
PD-1与PD-L1蛋白相互识别后该信号通路会被激活，产生的负向信号可诱导抗原特异性效应T细胞凋亡，这种免疫效应在一般生理机制下是为了防止过度免疫，从而避免附加损伤[5]。癌细胞受会上升自身PD-L1的表达，也许是受到相应细胞因子的刺激或者某些通路自发激活，具体机制尚存在争议。当外周免疫细胞主要是T细胞杀伤癌细胞时，PD-1与 PD-L1蛋白识别，激活该通路从而启动了“免疫刹车”，这会诱导T细胞程序性凋亡，癌细胞便能成功逃脱免疫杀伤[6]。如果阻断 PD-1／PD-L1通路的激活，就可以刺激免疫系统高效杀伤癌细胞，这就是PD-1／PD-L1阻断药物的理论基础[7]。既然PD-L1类单抗的抗肿瘤机制是解除免疫抑制的状态，和传统单抗不同，为了避免ADCC或CDC反应，目前上市的PD-1单抗都采用IgG4亚型，而PD-L1抗体都是IgG1亚型。
2.临床应用
截止至2019年12月，全球已有7种PD-1阻断药物和3种PD-L1阻断药物批准上市，均属于大分子抗体类药物，其中的4种PD-1单抗由我国自主研发，目前中国大陆批准上市的PD-1／PD-L1阻断药物有8种，分别为派姆单抗／帕博利珠单抗（Pembrolizumab），纳武单抗／纳武利尤单抗（Nivolumab），西米普利单抗（Cemiplimab），特瑞普利单抗（Toripalimab），信迪利单抗（Sintilimab），卡瑞利珠单抗（Camrelizumab），替雷利珠单抗（Tislelizumab），阿特珠单抗（Atezolizumab），阿维鲁单抗（Avelumab），度伐利尤单抗（Durvalumab）[8]。
三．特瑞普利单抗注射液与其纯化工艺流程
1.特瑞普利单抗
特瑞普利单抗是由君实生物苏州众合生物医药股份有限公司研制开发的抗PD-1受体的全人源单克隆抗体，可通过封闭T淋巴细胞的PD-1，阻断其与肿瘤细胞表面PD-L1结合，解除肿瘤细胞对免疫细胞的免疫抑制，使免疫细胞重新发挥抗肿瘤细胞免疫作用而杀伤肿瘤细胞[3]。
