开题报告内容：（包括拟研究或解决的问题、采用的研究手段及文献综述，不少于2000字）
- 研究背景
肺炎支原体在目前已经成为了小儿呼吸系统感染的常见病原之一，也是引起社区获得性肺炎（CAP）的排名第三位的病原体。肺炎支原体一直广泛地存在于世界的各地，各个年龄段均会感染，特别是在婴幼儿时期和青少年时期。肺炎支原体常年均可能发病，尤以夏、秋季多见，并且没有地域性的差别，还有可能会引起散发或者小流行，每 3-5 年就在全球流行[1]。肺炎支原体主要会感染呼吸道，引起上呼吸道感染、气管炎、支气管炎、肺炎以及咽炎等等，并通过血液到达肺外器官，另外，也有可能通过机体的免疫机制而引起肺外并发症。经调查研究表明，肺炎支原体的感染在临床症状上一般并不明显，以轻型感染和隐性感染见多，MP病程也较长，并发症较多，仅仅靠临床体征的观测是难以诊断的。因此，诊断MP必须要依靠在实验室的检查。肺炎支原体的诊断方法有很多，分离培养是最为可靠的一种方法，但是其操作费时，难以用作临床检查。因此，MP的临床诊断还是主要依据血清学试验，或聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）。PCR的敏感性和特异性都较高，但该法易受污染，且需要较好的设备，技术条件也要求较高，暂时临床检验室尚难以普及[4]。
目前，临床上应用最多的是血清学检验，常见的有三种方法，包括胶体金法,酶联免疫吸附试验以及被动凝集法。ELISA检出率高，且敏感度和特异性都较好，但大都需要特殊设备，操作人员也需要有专门的操作技能，一次测试包括采样到孵育、洗板、显色需要很长的时间，还要浪费大量的人力物力，更难以在缺少仪器设备的山区、基层医院和诊所开展[2]。被动凝集法采用含有ＭＰ（Ｍａｃ株）细胞膜成分致敏的人工明胶颗粒，这种致敏颗粒将会与血清中的ＭＰ抗体发生肉眼可见的凝集反应，当抗体效价大于或等于１∶１６０则是诊断ＭＰ感染的客观证据[3]。胶体金法的特点是检测速度快、操作简单便捷、节省人力物力，正好弥补了酶联免疫吸附试验（ELISA）的不便之处，使得临床检验甚至可以做到在床边进行，且不需任何的仪器、设备或是复杂的样本处理过程，得到的结果即使可取，真正可以做到床边检验（Point of Care Test，POCT），并可最大程度地避免在实验过程中出现各种因素对结果的影响，减轻检测人员的工作强度，而且该方法灵敏度和特异性也很高，稳定性及重复性都好，是目前适用于临床诊断MP感染的一种理想的方法[5]。
- 选题目的和意义
人体在感染了肺炎支原体以后，能够产生特异性的IgM和IgG两类类抗体。其中IgM类抗体出现较早，一般是在感染后的1周出现，在3～4周达到高峰，之后逐渐降低。而由于肺炎支原体的感染的潜伏期为2～3周，一旦患者出现症状，在就诊时，IgM抗体已达到相当高的水平，因此IgM抗体阳性可作为急性期感染的诊断指标。如IgM抗体阴性，则不能否定肺炎支原体感染， 需检测IgG抗体。IgG较IgM出现晚，需动态观察，如显著升高提示近期感染，显著降低说明处于感染后期。由此提示IgG与IgM同时测定，可提高诊断率，达到指导用药、提高疗效之目的。检测MP－IgM可以早期诊断MP的感染。早期诊断可以避免滥用抗生素造成病情怠误，降低患者的经济负担，减少不当治疗造成的毒副作用[6]。
- 选题研究内容
在查阅相关文献之后，采集样本，配置需要用到的诊断试剂，进行金标免疫渗滤法诊断小儿肺炎支原体感染的实验，整合数据。进行酶联免疫吸附实验和被动凝集法检测实验。
研究当地小儿肺炎支原体感染现状。三种方法同时实验，并对比阳性率和阴性率及其特异性和灵敏度。
- 研究路线
4.1 标本采集
在当地人民医院采集非抗凝外周静脉血2ml，于未加抗凝剂和促凝剂的一次性的干净容器内；置水浴箱37℃水浴20-30分钟；4000r/min，离心5min，弃去下层沉淀，留取血清于eppendorf管中封闭，-20℃下冻存待检。
但经冻融后的标本抗体的效价可能会有所下降。所以任何标本在临用前均须要充分离心，再取澄清液体部分做检测。
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- 制作检测用金标免疫渗滤法诊断试剂盒
配 配置试验用试剂，氯金酸在还原剂的作用下，聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液，在静电作用下成为稳定的胶体状态，即为胶体金。用胶体金标记单克隆抗体，作为标记示踪物。再将特异性MP抗原固相化于硝酸纤维素膜上，做成试纸，再与试剂板结合，成为试剂盒。
